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促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA试剂盒准确性

本文由 研域(上海)化学试剂有限公司 整理汇编

2018-09-19 10:00 278阅读次数

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促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA试剂盒用于测定猴血清、血浆及相关液体样本中促肾上腺皮质激素(ACTH)含量。实验原理促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猴促肾上腺皮质激素(ACTH)水平。用纯化的猴促肾上腺皮质激素(ACTH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入促肾上腺皮质激素(ACTH),再与HRP标记的促肾上腺皮质激素(ACTH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的促肾上腺皮质激素(ACTH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中猴促肾上腺皮质激素(ACTH)浓度。准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。灵敏度:Zdi检测浓度小于10pg/ml。特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。重复性:板内、板间变异系数均小于15%。促肾上腺皮质激素(ACTH)ELISA试剂盒操作步骤1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液(同生物素标记抗体工作液)100μl,37℃,60分钟。5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后15分钟以内进行检测。

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