资料库
仪器网>
资料库>使用抗Argonaute抗体进行microRNA研究的方法介绍
使用抗Argonaute抗体进行microRNA研究的方法介绍
-
本文由 研域(上海)化学试剂有限公司 整理汇编
2024-09-29 03:19 685阅读次数
文档仅可预览首页内容,请下载后查看全文信息!
-
立即下载
使用抗Argonaute抗体进行microRNA研究的方法介绍近年来,microRNA(miRNA)成为生命科学和医学领域的明星。人类和小鼠含有1000多种microRNA,虽然只有22个左右的碱基,但是在基因表达调控中起着至关重要的作用,参与细胞分化、个体发育,且与多种疾病相关,因此对于miRNA的研究越来越多。在细胞中,成熟的miRNA分子可与Argonaute(Ago)蛋白家族形成RNA沉默复合体(RISC),降解靶mRNA或者YZ转录(图1)。在人类中普遍存在4种Ago蛋白(Ago1-Ago4),在Ago家族蛋白中表达Z多的是Ago2,它具有Slicer活性,可切割其靶RNA,在microRNA调控路径中具有重要意义。针对这种Ago蛋白,利用抗体,经RISC免疫沉淀,即microRNA与靶mRNA共沉淀,由此可回收microRNA。使用抗Argonaute抗体进行microRNA研究的方法介绍
登录或新用户注册
请用手机微信扫描下方二维码
快速登录或注册新账号
微信扫码,手机电脑联动
更多资料
-
使用抗Argonaute抗体进行microRNA研究的方法介绍
- 使用抗Argonaute抗体进行microRNA研究的方法介绍近年来,microRNA(miRNA)成为生命科学和医学领域的明星。人类和小鼠含有1000多种microRNA,虽然只有22个左右的碱基,但是在基因表达调控中起着至关重要的作用,参与细胞分化、个体发育,且与多种疾病相关,因此对于miRNA的研究越来越多。在细胞中,成熟的miRNA分子可与Argonaute(Ago)蛋白家族形成RNA沉默复合体(RISC),降解靶mRNA或者YZ转录(图1)。在人类中普遍存在4种Ago蛋白(Ago1-Ago4),在Ago家族蛋白中表达Z多的是Ago2,它具有Slicer活性,可切割其靶RNA,在microRNA调控路径中具有重要意义。针对这种Ago蛋白,利用抗体,经RISC免疫沉淀,即microRNA与靶mRNA共沉淀,由此可回收microRNA。使用抗Argonaute抗体进行microRNA研究的方法介绍[详细]
-
2024-09-29 03:19
产品样册
-
抗甲状腺球蛋白抗体TGA的检测方法
- 上海金穗长期提供各种产品名称,以及蛋白质,酶,氨基酸,抗生素,微生物等各种实验室常用试剂,欢迎来电垂询!www.sh极nsuibio.com[详细]
-
2018-10-08 10:00
产品样册
-
抗DNA抗体的基本信息
- 抗DNA抗体的基本信息 抗DNA抗体有抗双链DNA(dsDNA)和抗单链(ssDNA)抗体之分。抗dsDNA抗体与SLE的关系密切,且随疾病的活动度而升降,病情好转者其滴度多下降甚或转阴。抗ssDNA抗体则与抗dsDNA不同,可在多种疾病出现,包括一些非自身免疫性疾病,如细菌和病毒感染。故在临床上无实用价值。而抗dsDNA抗体被认为是红斑狼疮(SLE)所特有。 测定本抗体的方法有间接免疫荧光法(IFA),放射免疫法(Farr法),ELISA,血凝法等。我国的临床工作者多采用前两种方法,尤其是IFA法。它是以短膜虫或马锥虫为底物,利用其体内含有的纯双链DNA,进行免疫荧光测定。血清稀释度达1:5或更高者称为阳性。以Farr法测抗DNA抗体,结合率>20%者为阳性。据北京协和医院资料显示,SLE阳性率为62%,活动期67.7%,缓解期29.1%,非SLE者阳性率虽达20%,但其结合率多在30%以下。有7%的正常人呈假性反应。结合率高于30%者几乎都是活动期SLE。 抗DNA的自身抗体在SLE发病中起一定作用。在一些SLE患者,DNA大分子存在于循环中或粘附于多种器官的微血管结构,这些循环或器官原位抗原型DNA均可与循环自身抗体发生反应,形成免疫复合物,激活炎症系统,在一些器官如肾脏,肺和脑组织引起免疫复合物介导的疾病,导致组织损伤。[详细]
-
2018-12-30 10:00
产品样册
-
抗小鼠整合素α5β1抗体的生成方法
- 抗小鼠整合素α5β1抗体的生成详情简介:整合是很重要的粘附分子的调节肿瘤和内皮细胞存活,增殖和迁移。整合素α5β1已被证明是血管生成过程中发挥着关键作用。此整合,volociximab(M200)的YZ剂,YZ内皮细胞的生长和运动在体外,独立的生长因子的周围环境,并在兔VX2肝癌模型在体内YZ肿瘤的生长。虽然已经过测试,在打开的标签volociximab,飞行员在黑色素瘤,癌和肾细胞癌Ⅱ期临床试验,评估行动的volociximab的机制已经受到了限制,因为这种抗体没有交叉反应,小鼠α5β1,排除其使用在标准的小鼠异种移植模型。生成方法:我们产生了面板的大鼠抗小鼠α5β1抗体,扼要重述的属性volociximab的抗体,该抗体识别的意图。杂交瘤克隆中筛选出类似的功能的volociximab,包括α5β1异源二聚体和纤维连接蛋白阻断整合素结合的特异性。抗体,符合这些标准的一个子集,其特征还在于他们的能力绑定到小鼠血管内皮细胞,YZ细胞迁移和体外血管生成块。从这个面板中选择一种抗体,涵盖所有的这些属性,339.1,和异种移植模型进行测试。雌性Sprague-Dawley大鼠(Simonsen的)从小鼠胎盘或用鼠标α5β1-Fc融合蛋白的纯化与α5β1腹腔内免疫。标准技术定影NSO-衍生的融合伴侣(美国典型培养物保藏ZX)从免疫的小鼠的脾细胞产生的单克隆抗体。甲面板α5β1-特异性抗体鉴定通过ELISA使用的Fc融合蛋白,并通过流式细胞仪分析小鼠内皮细胞和细胞系的结合。[详细]
-
2018-10-03 10:00
产品样册
-
如何使用扫描电镜进行血液研究
- 血液是人体的重要元素。它对所有器官和组织都至关重要,因为它提供了所需的氧气,并从细胞中去除多余的代谢物。但是血液不仅涉及到氧气运输,还包括免疫细胞和血小板,帮助保护身体免受各种疾病的侵袭,并参与到出血疾病治愈中。这篇博客将会更深入地了解扫描电镜(SEM)如何成为血液研究和相关领域实验室的一个重要工具。血栓的研究在西方国家,血栓是导致死亡的主要原因,止血和血栓的形成仍然是研究的ZD。在一项研究中,Schurgers等人[1]将斑马鱼(一种独特的生物模型)比作人类的血液。用扫描电镜(SEM)观察血凝块和纤维蛋白的超微结构,从而揭示纤维蛋白网络密度的差异。他们不仅通过SEM成像看到纤维的差异,而且还能够区别斑马鱼纤维蛋白网络中的不同细胞。与人类进行比较,这可能是**次,模型系统可能比假设的更加不同可能由于两种生物生存的环境条件不同。导管内的血栓微结构也是研究的一个重要课题。ZX静脉导管常用于重症监护。它们是不透明的,由硅树脂、聚氨酯或聚四氟乙烯制成,经常引起纤维蛋白的形成,导致随后发生血栓。图1:在受伤后阻止血液离开血管,形成血凝块。上图显示了通过血液涂片准备的血凝块扫描电镜(SEM)图像图2:凝块形成后,在蛋白纤维中被困的白细胞图像。[详细]
-
2018-08-22 10:00
产品样册
-
使用AIMsolution 软件进行区域成像的介绍
- 红外显微镜AIM-9000的操作软件AIMsolution配置Mapping程序(选购件)。通过该程序可进行点扫描和面扫描。并且在同一窗口可简单地进行样品的图像拍摄、扫描范围、光阑大小以及扫描间隔等设置。通过Mapping程序能够进行待测样品成分的面内分布的范围扫描,以及有助于纵轴方向分析的线扫描,以对样品中的微小区域进行详细分析。本文向您介绍使用AIMsolution的Mapping程序进行范围扫描的示例。[详细]
-
2018-08-26 10:00
产品样册
-
小鼠抗核抗体elisa试剂盒使用说明书
- 小鼠抗核抗体elisa试剂盒公司推荐产品有:非普拉宗UV法,标准品销售ZX,含量测定50mg常温,避光100487-200301茴三硫,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100489-200501香草醛,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100491-200901三氯叔丁醇,标准品销售ZX,含量测定50mg常温,避光100492-200301胆维丁,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100493-200801葡醛酸钠,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100495-200601盐酸羟胺检查50mg常温,避光100496-200801对氯苯酚检查50mg常温,避光100498-200301甲苯磺丁脲供打假专用100mg常温,避光100500-200801氯解磷定HPLC法,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100501-200901盐酸赛庚啶,标准品销售ZX,含量测定50mg常温,避光100502-200401氨基比林,标准品销售ZX,含量测定200mg常温,避光100503-200301沙利度胺,标准品销售ZX,含量测定50mg常温,避光100504-200501盐酸贝那替秦,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100505-200601安替比林,标准品销售ZX,含量测定200mg常温,避光100506-200301麝香草酚,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100508-200301苯酚,标准品销售ZX,含量测定50mg常温,避光100509-200401盐酸依匹斯汀,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100510-200902荧光素钠,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100511-201002甲硝唑杂质A(2-甲基-4(5)-硝基咪唑检查50mg常温,避光100512-200802盐酸氟西汀,标准品销售ZX,含量测定50mg常温,避光100513-200401双肼屈嗪HPLC法,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100514-200301盐酸阿米替林,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100518-201002钾UV法,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100519-200301异丙托溴胺,标准品销售ZX,含量测定100mg常温,避光100522-200601操作注意事项:1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。[详细]
-
2018-11-16 10:02
产品样册
-
简述抗核抗体的原理
- 简述抗核抗体的原理抗核抗体(antinuclearantibody,ANA)又称抗核酸抗原抗体,是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称,能与所有动物的细胞核发生反应,主要存在于血清中,也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。 抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率,如系统性红斑狼疮(SLE,95%~1**%)、类风湿性关节炎(RA,10%~20%)、混合性结缔组织病(MCTD,80%~1**%)、干燥综合症(SjS,10%~40%)、全身性硬皮病(85%~90%)、狼疮性肝炎(95%~1**%)、原发性胆汁性肝硬化(95%~1**%)等,但经皮质激素ZL后,阳性率可降低。抗核抗体在类风湿病人中约有20%~50%IgG型ANA呈阳性,小儿类风湿ANA的阳性率约19%~35%,伴发虹膜睫状体炎者阳性率高(50%~90%),故ANA阳性预示类风湿有发生慢性睫状体炎的可能。已发现75%类风湿病人有多形核白细胞的特异性ANA或抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)可使白细胞核受到破坏。[详细]
-
2018-12-30 10:00
产品样册
-
生物素标记的抗GMP-140抗体
- 生物素标记的抗GMP-140抗体[详细]
-
2024-09-16 03:36
专利
-
简述抗核仁抗体
- 简述抗核仁抗体抗核抗体的分类,由于核抗原不同,有多种不同的ANA。有抗DNA抗体、抗可提取的核抗原、抗组蛋白抗体、抗核仁抗体。抗核仁抗体是一组对核仁不同RNA成分的抗体。由于成分(4-6sRNA)不同,因此构成斑块,斑点,均质等不同图型。本核体在以HEP-2细胞为底物间接免疫荧光检查为明显。协和医院免疫组的阳性率是PSS38.5%,SLE6.1%,RA15.3%,(阳性者都合并有指端硬化),SS8.6%,PM/DM10.0%,雷诺现象25%,其他结缔组织病和正常人均阴性。抗核仁抗体不仅在PSSZ多见,且滴度亦高,故它对PSS诊断有一定的帮助。抗核抗体的检测在自身免疫病的临床诊断、鉴别诊断、评价LX和预后估计中具有较大的意义,因此常将抗核抗体的检测作为自身免疫病的重要初筛试验。[详细]
-
2018-12-30 10:00
产品样册
-
抗网硬蛋白抗体自身抗体
- 上海金穗生物公司是一家专业经营生物试剂、标准品、试剂耗材的公司,生物引擎在广大用户的帮助和支持下,经过不懈的努力,已成为国内生命科学领域产品的主要供应商之一,主要经营ELISA试剂盒、细胞、血清、抗体、金标试剂盒、生物试剂、耗材、培养基、一抗、二抗等产品,产品畅销国内大部分地区,销售额逐年稳步提高。上海金穗生物公司拥有雄厚的实力、合理的价格和优良的服务,能够及时解决和满足客户的各方面的需求,公司的服务和业务网络遍及全国,在同行获得一致好评。www.shjsbio.com[详细]
-
2018-10-08 10:00
产品样册
-
人抗BB抗体(BBAb)ELISA试剂盒使用说明书
- 人抗BB抗体(BBAb)ELISA试剂盒使用说明书[详细]
-
2016-04-27 00:00
选购指南
-
人抗胰岛素受体抗体elisa试剂盒使用说明书
- 人抗胰岛素受体抗体elisa试剂盒使用说明书[详细]
-
2015-06-04 00:00
安装说明
-
人抗DNA酶B抗体试剂盒使用说明书
- 人ELISA试剂盒操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。480pg/ml5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液240pg/ml4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液120pg/ml3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液60pg/ml2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液30pg/ml1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品Z终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。7.温育:操作同3。8.洗涤:操作同5。9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:计算以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。人ELISA试剂盒注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做标准曲线,**做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔**孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请Z后乘以总稀释倍数(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准。人ELISA试剂盒保存条件及有效期1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月[详细]
-
2018-09-19 10:00
产品样册
-
兔抗单核细胞抗体(AMA)elisa试剂盒使用说明书
- 【兔抗单核细胞抗体(AMA)elisa试剂盒】长期现货促销中……上海一基实业有限公司为您提供国产/进口【兔抗单核细胞抗体(AMA)elisa试剂盒】生物试剂、标准品|对照品、血清、抗体l抗原、ELISA试剂盒、培养基、抗生素、生物仪器、实验设备等科研系列产品。为您提供全方位的【兔抗单核细胞抗体(AMA)elisa试剂盒】的售中、售后服务。本公司ELISA试剂盒类产品有上千种,种属:人,猪,鼠,牛,鸡,蛇,植物,兔,猫,马,鱼等…………因网上发布数量有限,所以只发布了其中的一小部分,在本网站上如果查不到的您想要的产品,请来电咨询业务员021-60526763,为您查询,谢谢您的配合![详细]
-
2018-10-01 10:01
产品样册
-
人抗sp100抗体(sp100)elisa试剂盒使用说明书
- 上海一基实业有限公司主要生产经营标准物质/标准样品,实验室耗材等。同时代理美国、日本、英国,德国等国家的标准物质、标准样品。本着标准**、质量**,服务**,信誉**的宗旨,为客户提供售前.售中.售后的优质服务。我公司全体工作人员真诚的欢迎国内外客户的大力支持与合作。业务范围:a,销售中检所、自制标准品/对照品及进口试剂b,承接克级至公斤级高纯度单体的定制业务c,承接中药单体/标准品新品研发业务邮箱:yi极01@foxmail.com网址:http://www.yi极sy.com电话:021-60548335[详细]
-
2018-10-01 10:01
产品样册
-
人抗酿酒酵母抗体(ASCA)ELISA试剂盒使用说明书
- 人抗酿酒酵母抗体(ASCA)ELISA试剂盒使用说明书[详细]
-
2024-10-08 05:28
应用文章
-
小鼠抗核抗体(ANA)elisa试剂盒使用说明书
- 小鼠抗核抗体(ANA)elisa试剂盒使用说明书[详细]
-
2024-09-24 02:26
选购指南
-
抗狂犬病毒抗体(anti-RV)说明书
- 抗狂犬病毒抗体(anti-RV)说明书检测范围:96T3IU/L-120IU/L使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗狂犬病毒抗体(anti-RV)含量。抗狂犬病毒抗体(anti-RV)说明书实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗狂犬病毒抗体(anti-RV)水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入抗狂犬病毒抗体(anti-RV),再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗狂犬病毒抗体(anti-RV)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人抗狂犬病毒抗体(anti-RV)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(240IU/L)0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。抗狂犬病毒抗体(anti-RV)说明书维生素B12培养基价格,BR澳洲茄边碱,>98%,标准品,20311-51-7DMEM(低葡萄糖)培养基价格,Alpha-软脂酸香树精酯,,97%-99%以上,22255-10-33.5%NaCl鸟氨酸脱羧酶培养基价格,6-姜烯酚,HPLC≥98%,标准品,555-66-8龙血素B,HPLC≥98%,119425-90-0远藤氏琼脂培养基价格,BR[详细]
-
2018-10-23 10:30
产品样册
-
什么是抗精子抗体?
- 什么是抗精子抗体?有一位青年结婚三年没有孩子,夫妇俩来到国家计划生育委员会科学技术研究所的不育门诊。经过多次精液化验,指标完全正常。然后又经过对双方血液,及男方精液与女方宫颈粘液的免疫学检查,医生告诉他:在他的精液和血清中存在一种抗精子抗体,这可能是造成他们不育的原因。抗精子抗体是一个复杂的病理产物,男女均可罹患,其确切原因尚未完全明了。男性的精子、精浆,对女性来说皆属特异性抗原,接触到血液后,男女均可引起免疫反应,产生相应的抗体,阻碍精子与卵子结合,而致不孕。众所周知,人的机体存在一个具有特殊防御功能的系统───免疫系统。这是人们赖以生存、抵抗各种致病菌侵袭的强有力的武器。人的免疫系统功能有时会发生障碍,这可能是先天性的,也可能是后天获得性的。人体的免疫功能由亿万个各种不同的淋巴细胞所执行。被特殊抗原所激活的淋巴细胞产生两种不同的免疫反应,即体液免疫和细胞免疫反应。一旦异物侵入身体的某个部位,淋巴细胞就像亿万个武装起来的战士,立即调兵遣将,前仆后继,勇往直前,在白细胞、巨噬细胞等配合下,直至消灭这些入侵之敌。然而免疫反应并不都对个体有利,有时可引起变态反应。人体有些组织由于某种屏障隔绝,不能被免疫系统识别。例如精子的抗原发生在个体发育后期,晚于免疫耐受期,所以精子特异抗原具有自动和同种免疫原性。并且在正常情况下,由于解剖学原因,精子是与血循环系统隔绝的,从来没有与淋巴细胞相遇,所以不会发生免疫反应。一旦由于生殖道损伤或炎症,使它们相遇,则会发生免疫反应,产生抗精子抗体。[详细]
-
2018-12-30 10:00
产品样册
Copyright 2004-2025 yiqi.com All Rights Reserved , 未经书面授权 , 页面内容不得以任何形式进行复制
参与评论
登录后参与评论