酶比色法测试人血清中的胆固醇含量

本文由 上海科学仪器有限公司 整理汇编

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• 酶比色法测试人血清中的胆固醇含量

  临床化学使用化学过程测量血液中化学成分的含量。这对于疾病的早期诊断以及器官功能的监测是非常有用的。Z常见的用于临床化学的试样是血液和尿液。表1提供了使用UV/Vis分光光度计进行的Z常见的血液检测和可测试的项目。在这篇应用文献中，将介绍使用LAMBDATM465UV/Vis分光光度计和UVLabTM软件，通过酶催化方法测试人血清中胆固醇的水平。[详细]

  2018-08-17 10:00

  产品样册

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• 人胆固醇（C）酶联试剂盒供应

  人胆固醇（C）酶联试剂盒供应[详细]

  2015-07-08 00:00

  实验操作

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• 液体样本中Na-K-ATP酶的含量

  鱼Na-K-ATP酶酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鱼血清，血浆及相关液体样本中Na-K-ATP酶的含量。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼Na-K-ATP酶水平。用纯化的鱼Na-K-ATP酶抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Na-K-ATP酶，再与HRP标记的Na-K-ATP酶抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的Na-K-ATP酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鱼Na-K-ATP酶浓度。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：180U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤：1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**、第二孔中分别加标准品100μl，然后在**、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从**孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为120U/L,80U/L,40U/L,20U/L,10U/L）。2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：5U/L170U/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月CAS号:10294-54-9,硫酸铯,ARRatphosphoProteinKinaseC,P-PKCELISAKit人巨噬细胞刺激蛋白（MSP）ELISA试剂盒小鼠雌激素（E）ELISA试剂盒大鼠纤溶YZ因子/凝血酶激活的纤溶YZ物（TAFI）ELISA试剂盒CAS号:6298-19-7,3-氨基-2-氯吡啶?CAS号:343-55-5,双氯青霉素,分析标准品CAS号:13862-78-7,四硫代钨酸铵?MouseGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISAKitCAS号:29617-66-1,（S）-（-）-2-氯代丙酸,98%Mousekeratinocyteautocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISAKit兔血管内皮细胞生长因子（VEGF）ELISA试剂盒[详细]

  2018-10-23 10:31

  产品样册

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• 人血清中白蛋白与球蛋白的分离

  人血清中白蛋白与球蛋白的分离[详细]

  2024-09-18 18:09

  操作手册

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• Online-SPE法测定血清中抗生素类药物 万古霉素的含量

  Online-SPE法测定血清中抗生素类药物 万古霉素的含量[详细]

  2024-09-28 01:07

  应用文章

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• 土壤中养分含量的测试

  土壤中养分含量的测试[详细]

  2014-02-22 00:00

  期刊论文

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• 人胆固醇(CH)ELISA试剂盒

  人胆固醇(CH)ELISA试剂盒[详细]

  2013-12-06 00:00

  实验操作

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• 人胆固醇(CH)检测试剂盒

  人胆固醇(CH)检测试剂盒[详细]

  2015-03-16 00:00

  期刊论文

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• Online-SPE法测定血清中抗精神病药物 齐拉西酮的含量

  Online-SPE法测定血清中抗精神病药物 齐拉西酮的含量[详细]

  2021-02-08 14:29

  应用文章

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• Online-SPE法测定血清中抗精神病药物齐拉西酮的含量

  Online-SPE法测定血清中抗精神病药物齐拉西酮的含量[详细]

  2021-08-24 11:52

  应用文章

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• 血清中铜的测定

  血清中铜的测定[详细]

  2024-09-14 19:10

  实验操作

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• 比色法连续测定磷矿石中铁，铝的含量

  比色法连续测定磷矿石中铁，铝的含量[详细]

  2024-09-20 13:30

  课件

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• 食品中胆固醇的测定 GB 5009.1282016

  食品中胆固醇的测定GB5009.1282016[详细]

  2018-08-23 10:00

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• 血清铁测试盒说明书

  血清铁测试盒说明书[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 组织半胱氨酸（cysteine）含量比色法定量

  主要用途组织半胱氨酸（cysteine）含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过先酸性预处理，有机溶剂萃取后，在碱性条件下，与萘醌磺酸钠进行反应后，由次亚硫酸钠作用产生的红色显色产物，在分光光度仪下，即采用比色法来测定样品中半胱氨酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良沙利文反应（SullivanReaction）、成功实验证明的。其适用于各种组织（动物、人体等）裂解萃取液样品中半胱氨酸水平检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景L-半胱氨酸（L-cysteine；Cys；C）学名为2-氨基-3-巯基丙酸，是一种疏水性非必需α-氨基酸，分子式是HO2CCH(NH2)CH2SH或C3H7NO2S，分子量121.16，编码为UGU和UGC。其侧链是巯基（thiol），为非极性，作为亲核剂（nucleophile），参与酶类反应。氧化后，产生二硫化物和衍生物（disulfidederivative）胱氨酸（cystine），二硫化物成为蛋白质的结构形式。动物通过胱硫醚β合酶（cystathioninebetasynthase）和胱硫醚γ裂合酶（cystathionegammalyase）由丝氨酸（serine）和蛋氨酸（methionine）转化成同源半胱氨酸（homocysteine）、S-腺苷蛋氨酸（S-adenosylmethionine）、胱硫醚（cystathionine），Z后产生半胱氨酸和α-酮基丁酸（α-ketobutyrate）。而植物和细菌通过丝氨酸乙酰基转移酶（transacetylase）和O-乙酰丝氨酸巯基裂合酶（O-acetylserine（thio）lyase），由丝氨酸产生半胱氨酸和乙酸。半胱氨酸，是谷胱苷肽的前体，具有抗氧化作用、抗蛋白水解、使蛋白分子之间交联、参与硫化物代谢、与各种金属原子，例如铁、锌、铜等结合、参与蛋白质的转录后修饰、中和酒精毒性等功能。应用于食品调味和添加、化妆品防护、生物标记、药物等。血浆半胱氨酸水平用于评估心血管疾病风险；半胱氨酸和同源半胱氨酸的比例可以评价静脉血栓形成、心肌梗死、肾衰的风险。在植物中，半胱氨酸参与各种植物生理活动，例如光质流动（photoplasmicstreaming）、电子传导、光合成磷酸化、细胞分裂、维持抗坏血酸还原状态、抗寒性（frosthardiness）、调节作物成熟等。半胱氨酸代谢异常将导致胱氨酸病（cystinosis）、胱氨醇尿（cystinuria）、肝损伤、生长迟缓、毛发去色（hairdepigmentation）、水肿（edema）、嗜睡（lethargy）等。基于半胱氨酸，通过酸性预处理，有机溶剂萃取，进而在碱性条件下，与萘醌磺酸钠（1,2-naphthoquinone-4-sodiumsulfonate）进行反应，由次亚硫酸钠（sodiumhyposulfite）作用，产生显色产物，呈现红色，通过分光光度仪（505nm波长）来定量分析半胱氨酸的含量。[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 人24S-羟基胆固醇试剂盒使用方法

  检测范围：96T8pg/ml-240pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中24S-羟基胆固醇含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人24S-羟基胆固醇水平。用纯化的人24S-羟基胆固醇抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入24S-羟基胆固醇，再与HRP标记的24S-羟基胆固醇抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的24S-羟基胆固醇呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人24S-羟基胆固醇浓度。[详细]

  2018-09-19 10:01

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• 组织酪氨酸酶（tyrosinase）活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途组织酪氨酸酶（tyrosinase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过酪氨酸酶反应系统中底物酪氨酸氧化后，产生多巴色素，呈现吸光峰值的变化，即采用比色法来测定组织裂解悬液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物组织，尤其是皮肤、眼睛和黑色素瘤组织裂解悬液样品中酪氨酸酶的活性检测，以及YZ剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景酪氨酸酶（tyrosinase；EC1.14.18.1）是一种单酚单加氧酶（monophenolmonooxygenase），又称为单酚酶（monophenolase）或单酚二羟基苯丙氨酸：O2氧化还原酶（monophenoldihydroxyphenylalanin：O2oxidoreductase），具有双功能的含铜糖蛋白，广泛存在于植物、酵母和动物组织中，其蛋白结构、大小、糖基化方式、激活特征等都不同。人体酪氨酸酶是一个跨膜蛋白，而催化结构域在黑色素细胞（melanocyte）或色素细胞的黑色素器（melanosome）里。酪氨酸酶通过催化L-酪氨酸（L-tyrosine）等的o-羟基化（o-hydroxylation）反应变成L-多巴（L-dopamine），进而氧化产生黑色素底物多巴醌（dopaquinone），从而由多巴色素（dopachrome）转化为黑色素（melanin）中的真黑素（eumelanin），以及其它色素，包括毛发和眼睛色素。紫外线可以激活酪氨酸酶活性，严重时，会引起色素沉着（hyperpigmentation）。酪氨酸酶基因突变将导致I型眼皮肤白化病（oculocutaneousalbinism）。酪氨酸酶YZ剂成为增白化妆品的重要元素。基于底物酪氨酸，在酪氨酸酶的催化下，产生多巴色素，通过其吸光值的变化（475nm波长），来定量测定酪氨酸酶的活性。其反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• 细胞酪氨酸酶（tyrosinase）活性比色法定量检测试剂盒

  主要用途细胞酪氨酸酶（tyrosinase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过酪氨酸酶反应系统中底物酪氨酸氧化后，产生多巴色素，呈现吸光峰值的变化，即采用比色法来测定细胞裂解悬液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物细胞，尤其是黑色素细胞和黑色素瘤细胞裂解悬液样品中酪氨酸酶的活性检测，以及YZ剂筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景酪氨酸酶（tyrosinase；EC1.14.18.1）是一种单酚单加氧酶（monophenolmonooxygenase），又称为单酚酶（monophenolase）或单酚二羟基苯丙氨酸：O2氧化还原酶（monophenoldihydroxyphenylalanin：O2oxidoreductase），具有双功能的含铜糖蛋白，广泛存在于植物、酵母和动物组织中，其蛋白结构、大小、糖基化方式、激活特征等都不同。人体酪氨酸酶是一个跨膜蛋白，而催化结构域在黑色素细胞（melanocyte）或色素细胞的黑色素器（melanosome）里。酪氨酸酶通过催化L-酪氨酸（L-tyrosine）等的o-羟基化（o-hydroxylation）反应变成L-多巴（L-dopamine），进而氧化产生黑色素底物多巴醌（dopaquinone），从而由多巴色素（dopachrome）转化为黑色素（melanin）中的真黑素（eumelanin），以及其它色素，包括毛发和眼睛色素。紫外线可以激活酪氨酸酶活性，严重时，会引起色素沉着（hyperpigmentation）。酪氨酸酶基因突变将导致I型眼皮肤白化病（oculocutaneousalbinism）。酪氨酸酶YZ剂成为增白化妆品的重要元素。基于底物酪氨酸，在酪氨酸酶的催化下，产生多巴色素，通过其吸光值的变化（475nm波长），来定量测定酪氨酸酶的活性。其反应系统为：[详细]

  2018-11-18 10:00

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• Ca-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书

  Ca-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，机体在缺氧及等状态下，ATP酶受到损伤，活力下降。ATP酶活力的大小是各种细胞能量代谢及功能有无损伤的重要指标。本测试盒可测钠钾ATP酶、钙镁ATP酶的活性。样品为各种组织及红细胞等，本法的Zda特点是样品前处理不需要高速离心机，方法简便、快速。产品内容缓冲液（ReagentA）6毫升反应液（ReagentB）6毫升底物液（ReagentC）6毫升阴性液（ReagentD）6毫升标准品（reagentE）6微升产品说明书1份保存方式保存反应液（ReagentB）和底物液（ReagentC）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；底物液（ReagentC）避免光照，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于反应液配制的容器微型台式离心机：用于样品制备比色皿或酶标板：用于比色的容器分光光度仪：用于比色分析酶标仪：用于微量样品比色分析实验步骤实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（ReagentB）和底物液（ReagentC）置入冰槽里融化。底物液（ReagentC）避免光照。然后进行下列操作。样品准备选择一：血浆样品1．准备好ACD抗凝管（注意：避免使用肝素或EDTA抗凝管）2．抽取2毫升血液，置于抗凝管里3．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g4．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）5．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存6．（选择步骤）移取50微升进行蛋白定量测定选择二：血清样品1．准备好不含抗凝剂的储存管2．抽取2毫升血液，置于储存管里3．室温下，静置30分钟，直至血液凝结4．放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为5000g5．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）6．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存7．（选择步骤）移取50微升进行蛋白定量测定选择三：组织样本准确称取组织重量，按照重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍的是PBS或者生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，去上清液待测。二、测定准备1.准备好上述待测样品，置于冰槽里2.设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长440nm三、样本测定1．在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照，标准品孔和样品孔2．分别移取50微升缓冲液（ReagentA）到相应孔中3．设定标准品孔(加入50微升标准品），样本孔(加入50微升样本)阴性液孔(加入50微升阴性液（ReagentD）4．分别加入50微升反应液（ReagentB）5．轻轻摇动96孔酶标板6．在37℃温度下孵育2分钟7．放进酶标仪，置零8．取出酶标板，分别加入50微升底物液（ReagentC）9．轻轻摇动酶标板10．即刻放进酶标仪检测，包括（0分钟初始读数和5分钟读数）四，样本计算样本活性=样本OD值/标准OD值*标品浓度[详细]

  2024-09-29 05:34

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