细胞培养常见问题及其解决方法

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• 细胞培养常见问题及其解决方法

  细胞培养常见问题及其解决1.如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。2.何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。3.可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。4可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。5何谓FBS,FCS,CS,HS?FBS（fetalbovineserum）和FCS（fetalcalfserum）是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS（calfserum）则是指小牛血清。HS（horseserum）则是指马血清。6培养细胞时应使用5%或10%CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5%CO2培养细胞。7.Hank's平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank's平衡盐溶液（HBS）和Earle's平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能差别？HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles（2.2g/L）中比在Hanks（0.35g/L）中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。8.细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。更多常见问题及解决方法请见附件.........[详细]

  2024-09-29 22:57

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• ELISA操作常见问题及其解决方法

  ELISA操作常见问题ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在检测过程中除正常反应外，有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。下面就一些常见ELISA操作过程中的问题一一分析。1．样品稀释酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。因此，国外检测血清抗体的试剂盒，均规定将血清稀释至适当的倍数，以降低非特异性反应，使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。一般产品的样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验的灵敏度和特异性。但是，有些用户未能严格按使用说明书操作，如某些产品应取10μl样品进行稀释，个别用户取5μl甚至1μl样品进行稀释，由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够，因此造成样品稀释倍数不准确，检测结果出现问题。2．试剂盒平衡试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温（约25℃），一般需在室温放置20～30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不够充分。冬季室温低，可将试剂盒置37℃温箱20分钟。3．样品和试剂的混匀稀释前、后的样品必须充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。4．加样在现在的ELISA商品试剂盒中，必然有使用微量加样器加入样本的步骤。注意的关键点是：加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。加样太快，无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。5．温育温育是ELISA测定中影响测定成败Z为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。Z为常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改变说明书操作，使用自己喜欢的温育时间和温育温度，这样造成一些不必要的麻烦。因为，不同试剂盒有不同的温育时间和温育温度的选择，随意更改温育时间或者温育温度将导致试验结果出现偏差。6．洗板固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性。洗板对于ELISA测定来说，也是极其关键的一步。洗液尽量不要溢出孔外；加洗液后要静置1分钟，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及时更换吸水纸，尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去，否则可能影响试验结果。更多ELISA操作常见问题及其解决方法请见附件......[详细]

  2024-09-30 14:23

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• 恒温恒湿试验箱常见问题及其解决方法

  恒温恒湿试验箱常见问题及其解决方法1、在高温试验中，如温度变化达不到试验温度值时，可以检查电器系统，逐一排除故障。如恒温恒湿试验箱温度升得很慢，就要查看风循环系统，看一下风循环的调节挡板是否开启正常，反之，就检查风循环的电机运转是否正常。如温度过冲厉害那么就需要整定PID的设置参数。如果温度直接上升，过温保护，那么，控制器出故障，须更换控制仪表。2、当恒温恒湿试验箱低温达不到试验的指标，那你就要观察温度的变化，是温度降的很慢，还是温度到一定值后温度有回升的趋势，前者就要检查一下，做低温试验前是否将工作室烘干，使工作室保持干燥后再将试验样品放入工作室内再做试验，工作室内的试验样品是否放置的过多，使工作室内的风不能充分循环，在排除上述原因后，就要考虑是否是制冷系统中的故障了，这样就要请厂家的专业人员进行检修。后者的现象是恒温恒湿试验箱设备的使用环境不好所致，设备放置的环境温度，放置的位置（箱体后与墙的距离）要满足要求（在设备操作使用说明中都有规定）。3、恒温恒湿试验箱在做湿热试验中，出现实际湿度会达到1**%或者实际湿度与目标湿度相差很大，数值低得很多，前者的现象：可能是湿球传感器上的纱布干燥引起，那就要检查湿球传感器的水槽中是否缺水，水槽中的水位是由一水位控制器自动控制的，查水位控制器供水系统是否供水正常，水位控制器工作是否正常。另一种可能就是湿球纱布因使用时间长，或供水水质纯净度的原因，会使纱布变硬，使纱布无法吸收水份而干燥，只要更换或清洗纱布即可排除以上现象。后者的现象主要是恒温恒湿试验箱的加湿系统不工作，查看加湿系统的供水系统，供水系统内是否有一定的水量，控制加湿锅炉水位的水位控制是否正常，加湿锅炉内的水位是否正常。如以上一切都正常，那就要检查电器控制系统，这要请专业维修人员进行检修。4、恒温恒湿试验箱设备在试验运行过程中突然出现故障时，控制仪表上出现对应的故障显示提示并有声讯报警提示。操作人员可以对照设备的操作使用中的故障排除一章中快速检查出属于哪一类故障，即可请专业人员快速排除故障，以确保试验的正常进行。其它环境试验设备在使用中还会有其它的现象，那就要具体现象，具体分析和排除。[详细]

  2018-09-03 10:00

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• 电站常见问题解决方法

  电站常见问题解决方法[详细]

  2024-09-15 08:36

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• 如何解决细胞培养常见问题

  如何解决细胞培养常见问题[详细]

  2013-11-01 00:00

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• 细胞培养常见问题及解答

  细胞培养常见问题及解答[详细]

  2016-09-13 00:00

  期刊论文

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• 温度试验箱常见问题解决方法

  温度试验箱常见问题解决方法[详细]

  2010-03-04 00:00

  应用文章

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• 移液器常见问题和解决方法

  移液器常见问题和解决方法[详细]

  2013-12-10 00:00

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• 电子汽车衡常见问题解决方法

  电子汽车衡这款产品是我们现在Z常见的一款产品了，我们上海恒刚仪器仪表有限公司专业生产销售电子汽车衡，我司的电子汽车衡现在已经销往全国各地了哦，大家也就能想到我司的这款电子汽车衡有多受欢迎了吧，有感兴趣的朋友欢迎大家前来我司咨询！今天，小编就来给大家说说关于电子汽车衡的一些相关知识，电子汽车衡使用时间久了可能就会出现一些问题，那大家在面对电子汽车衡出现问题时**不要惊慌，首先要知道出现问题的原因，那样我们才能对症下药。下面，小编就来给大家说说关于电子汽车衡常见的问题以及解决方法吧，希望大家能够认真阅读，相信大家读完本文后一定会有所收获的。想了解电子汽车衡常见的问题以及解决方法详细信息请点击，文件纯属于免费下载，大家可以放心使用！感谢您的大力支持！本文由上海恒刚仪器仪表有限公司整理提供。[详细]

  2018-10-11 10:00

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• 金相显微镜常见问题的解决方法

  金相显微镜常见问题的解决方法[详细]

  2024-09-16 12:39

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• 弹出式烘箱常见问题解决方法

  1. 弹出式烘箱样品加热到时间后后，打开抽屉找不到样品了 这是因为样品尺寸过大，样品不平整或者放置样品的时候太靠近抽屉的外部，导致抽屉底板打开后，样品未落入下料口，直接卡在风道内了。这时候就需停止加热，关闭设备。打开仪器后部维护门，拆开风道固定螺丝，移出风道仓，取出掉入的样品。防止样品堆积导致抽屉打不来，温度探头损坏等故障。 2. 弹出式烘箱样品抽屉推进去，加热指示灯不亮，必须手按压着才工作 烘箱的抽屉左右各有一个定位销，如果定位销位置太短，就会导致抽屉无法固定，手松开没法定位，这时需要手动调节定位销的位置，使得抽屉正好固定且缝隙不大不漏风。另外抽屉里面还有一个到位接触开关，如抽屉关紧后，烘箱还不工作加热那就需要调节里面的接触开关，请联系我们的售后工程师。 3. 样板每次卡在底板抽屉中漏不下来 这是因为托盘打开的幅度过小，没法把样品落下来，需要调节托盘运动气缸的打开幅度接触开关，具体方法请联系我们的售后工程师。 4. 每次样品落掉后，抽屉的底板无法还原成闭合状态，需抽开手动推上去 这是因为托盘闭合的幅度过小，没法把托盘顶到位，需要调节托盘运动气缸的闭合幅度接触开关，具体方法请联系我们的[详细]

  2024-09-16 05:41

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• 双层玻璃反应釜常见问题及解决方法

  双层玻璃反应釜常见问题及解决方法[详细]

  2014-08-28 00:00

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• BS66系列探测器常见问题解决方法

  BS66系列探测器常见问题解决方法我公司向您推荐的BS66系列(以下简称探测器)，是一种可连续检测泄漏气体浓度的本质安全型设备。它适用于防爆场所气体泄漏抢险，地下管道或矿井等场所，能有效保证工作人员的生命安全不受侵害，生产设备不受损失。便携式气体探测器采用自然扩散方式检测气体，敏感元件采用优质气体传感器，具有极好的灵敏度和出色的重复性；仪器采用嵌入式微机控制，操作简单，功能齐全，可靠性高，具有多种自适应能力；使用点阵液晶显示器，直观清晰；小巧美观的便携设计不仅使您爱不释手更便于您移动使用。便携式气体探测器外壳采用高强度工程塑料，复合防滑橡胶而成，强度高、手感好，并且防水、防尘、防爆。由于技术水平有限我们在研制的过程中难免会出现纰漏，如出现问题请您参照如下表格：电路故障请联系经销商或制造商维修对检测气体无反应电路故障请联系经销商或制造商维修显示不准确传感器超期请联系经销商或制造商更换传感器长期未标定请及时标定时间显示错误电池电量完全耗尽及时充电并重新设置时间强电磁干扰重新设置时间零点校准功能不可用传感器漂移过多及时标定或更换传感器仪器正常检测界面显示“-0”传感器漂移进行零点校准当仪器正常检测界面显示满量程传感器故障请联系经销商或制造商更换传感器上述方法如仍未解决问题请拨打我公司的客服电话，您的意见就是我们前进的Zda动力。[详细]

  2018-10-07 10:02

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• ELISA中常见问题及解决方法

  下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法：1.选择试剂选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。2.加样可能原因：1）血清或血浆标本分离不好即进行加样；2）手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）；3）加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。更多资料请下载文件小鼠elisa试剂盒[详细]

  2018-10-08 10:01

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• 液相常见问题和解决方法

  液相常见问题和解决方法[详细]

  2024-09-28 00:15

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• 细胞培养常见的问题和解决方法

  细胞培养常见问题及回答如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始，各种目的无血清培养**AIMV（12005）培养基（SFM）。L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有Z终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？GlutaMAX-I二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有Z小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。什么培养基中可以省去加酚红？酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000个/毫升，在0.1毫升的细胞悬液中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。如何消除组织培养的污染？当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。1.在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。2.分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0mg/ml。3.每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。4.确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2～3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2～3代。5.在无抗生素的培养基中培养细胞一代。6.重复步骤4。7.在无抗生素的培养基中培养4～6代，确定污染是否以已被消除。培养基中丙酮酸钠的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。目录上说，Hank's平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank's平衡盐溶液（HBS）和Earle's平衡盐溶液（EBS）有什么本质的功能差别？HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles（2.2g/L）中比在Hanks（0.35g/L）中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。二价离子YZ胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？二价离子的确YZ胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持YZ胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。我SYSF900II时，细胞生长良好，但是我的蛋白产物不如使用Graces液和10%胎牛血清时效果好。如果目的蛋白是一个后期蛋白，它将与蛋白酶一起表达，这些蛋白酶将会作用于目的蛋白。在加有血清的培养基中，这些蛋白酶将作用到血清中的蛋白，从而使目的蛋白产品保持完好。在无血清配方中，蛋白酶作用的**底物是你的目的蛋白。为了避免这一问题，加入一些蛋白酶YZ剂或加入少量的血清（少于1％），让血清给蛋白酶提供作用底物。20°C下配制的缓冲液，在较高或较低的温度下PH值会改变吗？对于普通使用的缓冲液，PH值随温度变化而变化。下表列出温度改变10℃时，PH值的变化情况：例如20℃下配制PH7.4Tris缓冲液,40℃时PH值为7.4-（2x0.310）＝6.78缓冲系统pKa/20℃[Delta]pKa/10℃Mes6.15-0.110Ada6.60-0.110Pipes6.80-0.08ces6.90-0.200Bes7.15-0.160Mops7.20-0.013Tes7.50-0.200Hepes7.55-0.140Tricine8.15-0.210Tris8.30-0.310Bicine8.35-0.180Glycylglycine8.40-0.280室温下（25）配制的Tris-HCl溶液，在37℃使用时PH值是多少？缓冲液的PH值随温度变化而变化。下表列出了50mMTris-HC溶液在4℃，25℃，37℃时，不同的PH值。4°C25°C37°C8.17.57.28.27.67.38.37.77.48.47.87.58.57.97.68.68.07.78.78.17.88.88.27.98.98.38.09.08.48.19.18.58.29.28.68.39.38.78.49.48.88.5昆虫细胞培养的Z适PH值和渗透压是多少？生长培养基的PH值对细胞的增殖和病毒或重组蛋白的生产均会产生影响。对于大部分鳞翅类昆虫细胞系，在PH值6.0～6.4范围的大部分应用效果良好。培养鳞翅类昆虫细胞系时，培养基的Z适渗透压是345-380mOsm/kg.。为保证可靠和持久的细胞培养方式，减少技术问题，保持PH值和渗透压在以上所列的范围之内。HighFive细胞有任何其它名称吗？HighFive细胞也被称为Trichoplasiani5B1-4和BTI-TN-5B1-4。PFHM-II和HYBRIDOMA-SFM之间有什么差别PFHM-II（Protein-freeHybridomaMedium）是不包含有蛋白质的单克隆抗体生产培养基。如果作为杂交瘤生产培养基使用，PFHM-II可能需要补充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM既是杂交瘤生产培养基，也是单克隆抗体生产培养基。它包含低水平的蛋白质。在HighFive无血清培养基中去污剂的浓度是多少？HighFive无血清培养基中去污剂的浓度：0.025g/LTween-80，1.0g/LPluronicPoly-all。HighFive细胞用多大的密度冻存？3.0x10E6cells/ml。在我的果蝇培养基中发现形成白色沉淀，加热后溶解。它是什么？对我的细胞有害吗？可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培养基中谷氨酰胺的浓度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的浓度比在RPMI1640中高25倍，而且比谷氨酰胺更加难以溶解。沉淀也可能是不止一种成分的复合物。它可能是由于贮存在局部温度较低的地方引起。只要沉淀在培养条件下可以溶解，对实验不会有不利的影响。如何从T25瓶中转移sf9细胞？能用胰蛋白酶消化吗？我们QL推荐使用脱落细胞的方法，因为这项技术破坏性Z小，生活力Z高。正如手册上所显示，通过使用巴斯德吸液管，让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在必要的情况下，才使用胰酶消化细胞。胰酶消化一个T25瓶的sf9细胞：1.去除培养基。2.用2ml1xPBS（足以覆盖细胞表面）洗涤细胞，去除PBS。3.加入2ml1x胰酶EDTA（恰好覆盖细胞表面）。4.37℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。5.向细胞中加入2ml细胞培养液，移入锥形管，用2ml培养液洗瓶壁，移入同一锥形管中。（培养基中的FBS终止了胰酶的活性。）6.离心（1100rpm）沉淀细胞。去除培养基。7.用新的培养基重新悬浮细胞。传代。在Sf9,Sf21,和highFive细胞悬浮培养时，肝素的使用量是多少？为了防止悬浮培养细胞聚集的形成，使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。在重新冻存sf9细胞前，它可以传多少代？随着传代的次数的增加，它的感染能力会降低吗？通常情况当细胞经过30次传代后，应该返回冻存。无论什么时候计数时，都应该检查细胞活力。如果超过95％的细胞保持有活力和在大约30小时左右加倍，细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降，它们的感染力将不在是有效的。Techtips●贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基，可能在放置几天后颜色变紫。这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时，碳酸氢纳导致了pH值的上升。您可以在使用前松开瓶口，在CO2培养箱孵育培养基10-15分钟，来校正溶液的pH值（确定松开瓶口以保证气体交换）。●如果细胞培养基偶然被冻，您应该熔化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。●您要查找培养基成分表吗？您可以在GIBCO目录**章的后面或在我们网站的技术资源部分找到。●当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。●一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。●总之，大部分添加物和试剂Z多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。●在进行传代培养时，我们强烈推荐进行台盼兰活性记数。研究者常常通过一个简单的稀释（1∶4或1∶2）进行传代，不进行活性检测，您可能接种比你认为的低的多的浓度的细胞，这常常可能导致生长缓慢或培养物根本不生长。●在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在4℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不稳定。●GIBCO产品的贮存期立足于实时稳定性研究结果。产品说明在超过指定的贮存期的一段时间内，产品仍然在可接受的范围内，但是由于在超过指定的效期后，产品的性能和稳定性没有检测，我们不推荐使用过了效期的产品。[详细]

  2018-09-02 10:00

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• 振动试验台常见故障及其解决方法

  振动试验台常见故障及其解决方法[详细]

  2024-09-30 21:30

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• 离子色谱仪常见问题之原因及解决方法

  离子色谱仪常见问题之原因及解决方法[详细]

  2014-02-21 00:00

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• 电热真空干燥箱常见问题及解决方法

  电热真空干燥箱常见问题及解决方法[详细]

  2011-10-13 00:00

  实验操作

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• ELISA实验中常见问题及解决方法

  ELISA中常见问题及解决方法ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我公司将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法1选择试剂选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。2加样可能原因：a.血清或血浆标本分离不好即进行加样；b.手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长（特别是室内温度较高时）；c.加完标本再加酶试剂时酶液溅出孔外。解决办法：a.标本为血清：**将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10T，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。b.加样后及时放入孵箱。c.加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。d.如果采用AT或其他全自动加样，**选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。e.标本较多时，请分批操作。3孵育可能原因：a.孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；b.孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。解决办法：a.贴封片或加盖；b.按说明步骤严格控制操作时间。4洗板可能原因：a.采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。b.采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。c.反应板过多造成洗板等待时间长。解决办法：a.保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后**在吸水纸（选择干净、无或少尘的吸水材料）上轻轻拍干；b.合理安排，或多用几台洗板机。5显色可能原因：a.显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂；b.加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法：a.显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂，肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用；b.加样时保持显色剂不外流；c.A、B液应避免接触金属器械。6终止可能原因：如加终止液时产生较多气泡，导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。7读板如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;尽可能实现ELISA检测标准自动化，有效提高检测质量。在实际操作中，除了选择优良试剂外，必须严格按照操作步骤进行操作，同时作好室内质控、室间质评，以严谨的工作作风检测每一份标本，才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪，这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。[详细]

  2018-09-02 10:00

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