人抗中性粒/ZX体抗体(ACA)ELISA试剂盒

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2024-09-28 00:04 102阅读次数

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• 人抗中性粒/ZX体抗体(ACA)ELISA试剂盒

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• 人抗中性粒/ZX体抗体(ACA)ELISA试剂盒

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  操作手册

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• 人抗着丝点抗体（ACA/CENP）ELISA检测试剂盒说明书

  人抗着丝点抗体（ACA/CENP）ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用试验原理：ACA/CENP试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知ACA/CENP浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ACA/CENP和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ACA/CENP的活性浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：400ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗ACA/CENP抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型自备材料1．蒸馏水。2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3．振荡器及磁力搅拌器等。安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。试剂的准备1．标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：400ng/ml（6号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。200ng/ml（5号标准品）100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液100ng/ml（4号标准品）100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液50ng/ml（3号标准品）100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液25ng/ml（2号标准品）100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液12.5ng/ml（1号标准品）100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液0ng/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。操作步骤1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。9．在450nm波长处测定各孔的OD值。性能1.灵敏度：Z小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。2.特异性：不与人其它细胞因子反应。3.重复性：板内、板间变异系数均小于10%。4.局限性：6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到极ng确的结果。结果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的ACA/CENP标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的ACA/CENP含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围：0-400ng/ml4、敏感度：1.0ng/ml[详细]

  2018-11-16 10:02

  产品样册

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• 人抗中性粒细胞抗体(ANA)检测试剂盒

  人抗中性粒细胞抗体(ANA)检测试剂盒[详细]

  2015-03-11 00:00

  标准

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• 人抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)检测试剂盒

  人抗中性粒细胞颗粒抗体(ANGA)检测试剂盒[详细]

  2024-09-28 11:52

  安装说明

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• 人抗心磷脂抗体（ACA） 酶联免疫分析试剂盒使用说明书

  人抗心磷脂抗体(ACA)酶联免疫分析试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T1U/mL-40U/mL使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗心磷脂抗体(ACA)含量。实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗心磷脂抗体(ACA)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入抗心磷脂抗体(ACA)，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗心磷脂抗体(ACA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人抗心磷脂抗体(ACA)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（80U/mL）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。人抗心磷脂抗体(ACA)酶联免疫分析试剂盒操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。40U/mL5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液20U/mL4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液10U/mL3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液5U/mL2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液2.5U/mL1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。人抗心磷脂抗体(ACA)酶联免疫分析试剂盒计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间**控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．请每次测定的同时做标准曲线，**做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔**孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月[详细]

  2018-09-27 10:00

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• 肾上腺皮质抗体（ACA）ELISA试剂盒实验需求

  肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒需要的器材（1）聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，人ELISA试剂盒ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。（2）小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。（3）4℃冰箱，37℃孵育箱。肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒需要的试剂（1）包被缓冲液（PH9.60.05M碳酸盐缓冲液）:NaHCO31.59克NaHCO32.93克加蒸馏水至1000ml（2）洗涤缓冲液（PH7.4PBS）：0.15MKH2PO40.2克Na2HPO412H2O2.9克NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05%0.5ml加蒸馏水至1000ml（3）稀释液：牛血清白蛋白（BSA）0.1克人ELISA试剂盒加洗涤缓冲液至100ml或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。（4）终止液（2MH2SO4）：蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98%）21.7ml。（5）底物缓冲液（PH5.0磷酸枣柠檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml0.1M柠檬酸（19.2克/L）24.3ml加蒸馏水50ml。（6）TMB（四甲基联苯胺）使用液:TMB（10mg/5ml无水乙醇）0.5ml底物缓冲液（PH5.5）10ml0.75%H2O232μl（7）ABTS使用液:ABTS0.5mg底物缓冲液（PH5.5）1ml3%H2O22μl（8）抗原、抗体和酶标记抗体。（9）正常人血清和阳性对照血清。肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒的包被：包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时间，包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置一夜，37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的Z适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化，每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。一般蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。肾上腺皮质抗体(ACA)ELISA试剂盒的封闭：封闭（blocking）是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的手续与包被相类似。Z常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂，其Zda的特点是价廉，可以高浓度使用（5%）。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用，但由于奶粉的成份复杂，而且封闭后的载体不易长期保存，因此在试剂盒的制备中较少应用。[详细]

  2018-09-19 10:00

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• 人抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA)检测试剂盒

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  猪抗中性粒细胞弹性蛋白酶抗体(ANEA)ELISA试剂盒[详细]

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• 人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒

  人抗斑疹伤寒抗体(anti-typhus-Ab)ELISA试剂盒[详细]

  2013-12-06 00:00

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