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电转化仪GX转染mRNA进入小鼠受精卵并促进基于CRISPR/Cas9的基因组编辑
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本文由 倍辉科技有限公司 整理汇编
2024-09-11 17:47 652阅读次数
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电转化仪GX转染mRNA进入小鼠受精卵并促进基于CRISPR/Cas9的基因组编辑
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电转化仪GX转染mRNA进入小鼠受精卵并促进基于CRISPR/Cas9的基因组编辑- 电转化仪GX转染mRNA进入小鼠受精卵并促进基于CRISPR/Cas9的基因组编辑[详细]
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2024-09-11 17:47
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2024-05-30 09:33
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小鼠ELISA试剂盒能促进化疗后的血细胞再生- 小鼠ELISA试剂盒化疗杀死血细胞，也能够杀死癌细胞，因此经常伴随着致命的结果。如今，耶鲁大学干细胞研究人员鉴定出一种方法，他们希望这种方法有朝一日将有助于接受化疗ZL的癌症病人维持一种健康的血液供应。相关研究结果于10月18日刊登在CellReports期刊上。小鼠ELISA试剂盒在耶鲁大学干细胞ZX与癌症ZX遗传学助理教授JunLu的指导下，研究人员研究了血细胞如何再生。Lu对小片段被称作微RNA（microRNA,miR）的遗传物资在血液产生和血干细胞和祖细胞功能所发挥的作用特别感兴趣。这些血祖细胞有助于确定所产生的血细胞类型。化疗杀死这些类型的血祖细胞，使得血液再生很困难。尽管红细胞能够通过灌注被替换，但是白细胞和血小板经常不能很好地复原，这就使得癌症病人很容易遭受感染和出血。利用一种新技术来同时分析活小鼠体内的大量miR，研究人员鉴定出几种miR参与血液形成。当他们让这几种miR中的miR-150失去功能时，他们发现小鼠能够更加有效地再生化疗所破坏的白细胞和血小板。缺乏这种这种miR的小鼠没有表现出不良的健康影响。相反地，携带活性miR-150的小鼠很难再生新的血细胞[详细]
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2024-09-30 07:35
产品样册
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Nature:胞外基质蛋白Agrin促进小鼠心脏再生- 心脏病仍是全世界范围内死亡的主要原因。当遭受心脏疾病时，心肌细胞（CMs）会被瘀痕组织替换，瘀痕组织不能完成收缩，因此不能参与泵血，导致剩余健康心肌组织压力增大，Z终导致心力衰竭。在低等脊椎动物如蝾螈和斑马鱼中，心肌细胞能够高效的再生受损心脏。但是，在哺乳动物中，有丝分裂后的成熟心肌细胞对受损组织的修复能力有限，再生和修复损伤能力只能持续到出生的时候，此后，这种能力便会永久消失。有趣的是，在新生小鼠中，心肌细胞增殖在出生一周之内足以修复心脏损伤，这一周的时间可以给科学家提供一个时间窗口来探究促进心脏再生的线索。今天，与大家分享一篇2017年由以色列威兹曼科学研究院的Eldad Tahzor 教授发表在Nature（IF=40.137）上的文章《The extracellular matrix protein Agrin promotes heart regenerationin mice》，作者发现新生小鼠心脏中的聚集蛋白(Agrin)似乎可以控制心肌细胞的再生过程。当将其注射到遭受心脏病发作的成年小鼠心脏中时，Agrin可以开启心肌细胞再生功能，修复受损心肌细胞。[详细]
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2024-09-27 18:48
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2024-09-24 22:09
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2010-09-27 00:00
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2013-10-12 00:00
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2013-11-01 00:00
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2024-09-29 03:57
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- 在本研究中，我们评估了Thermo ScientificTM Q Exactive TM GC 组合四极杆-Orbitrap 质谱仪（MS）在准确筛查适合 GC 分析的农药时的表现。Q Exactive GC Orbitrap MS 能够提供的质量分辨率高达 120，000（m/z 200，峰高一半处的全峰宽，FWHM），因而能够实现高准确度的质量测定，从而有效地在复杂基质中将被分析物与共流出的等质量数干扰物等杂质分离开。高扫速和单次目标分析物扫描内的高动态范围（> 5000）也都有助于从复杂基质中检出痕量化合物。[详细]
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2019-01-18 15:19
应用文章
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2007-09-04 00:00
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2016-05-04 00:00
报价单
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- 基因组DNA提取相关
- 基因组DNA相关基因组DNA提取试剂盒简介：DNA是遗传信息的载体，是Z重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，为了进行测序、杂交、基因表达、文库构建等试验，获得高分子量和高纯度的基因组DNA是非常重要的前提，因此基因组DNA的提取也是分子生物学试验技术中Z重要、Z基本的操作之一。Solarbio公司提供各种不同样品基因组DNA提取试剂盒，如植物、动物、细菌、细胞、血液、酵母等基因组DNA提取试剂盒。所提取的基因组纯度高，片段大小在50kb左右。用户可根据需要选用不同的试剂盒来进行不同样品的抽提。基因组DNA提取的原则：1、保证核酸一级结构的完整性（因为遗传信息全部储存在核酸一级结构中，故完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的基础）。2、排除其它分子（如蛋白质、多糖、脂类、有机溶剂等）的污染，使下游试验顺利进行。基因组DNA提取的原理和方法：DNA与组蛋白构成核小体，核小体缠绕成中空的螺旋管状结构，即染色丝，染色丝再与许多非组蛋白形成染色体。染色体存在于细胞核中，外有核膜及胞膜。从组织中提取DNA必须先将组织分散成单个细胞，然后破碎胞膜及核膜，使染色体释放出来，同时去除与DNA结合的组蛋白及非组蛋白。1、样品预处理从各种不同来源的样品（如细菌、酵母、血液、动植物组织细胞等）中提取高纯度的基因组DNA，因细胞结构及其成分不同，样品预处理方式也不同，以下简单介绍常用提取材料的预处理方式，若需详细了解，请参考本公司各基因组DNA提取试剂盒说明书。部分样品预处理方式:植物材料液氮研磨动物材料匀浆、液氮研磨培养细胞蛋白酶K处理细菌溶菌酶破壁酵母破壁酶破壁、玻璃珠研磨血液红细胞裂解液去红细胞2、细胞裂解CTAB法：适用于植物组织、真菌等。CTAB是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。该复合物在高盐溶液中（>0.7MNaCl）是可溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、多酚等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。SDS法：适用于细菌、血液、酵母、动物组织、细胞等。SDS是一种阴离子去污剂，可溶解细胞膜，裂解细胞，使蛋白质变性、染色体解体。其它裂解方法：物理方式：机械剪切、超声波破碎、研磨匀浆等化学方式：异硫氰酸胍、碱裂解等酶法：蛋白酶K3、DNA分离纯化纯化要求：核酸样品中不应存在对酶（如核酸内切酶、DNA聚合酶等）有YZ作用的成分。其它生物大分子如蛋白质、多糖、多酚和脂类分子等污染应降低到Zdi程度。排除其它核酸分子的污染，如提DNA时应去除RNA，反之亦然。纯化方法：细胞破碎后，常使用吸附材料结合方法去除杂质和纯化DNA，主要有硅基质材料、阴离子交换树脂和磁珠等。因硅基质材料可特异吸附核酸DNA，使用方便、快捷，不需要使用有毒溶剂如酚、氯仿等，使得提取基因组像过滤一样简单，因此硅基质材料成为大规模分离纯化DNA的通用方法。硅基质材料吸附核酸的原理：主要利用DNA在高盐低pH值环境下与硅基质材料相结合，在低盐高pH值环境下与硅基质材料脱离的特征。其机理可能是高浓度盐离子破坏了硅基质水分子结构，形成阳离子桥，当盐被清除后，再水化的硅石破坏了基质和DNA之间的吸引力，因而DNA从硅基质上被洗脱下来。注意事项：尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏。减少化学物质对DNA的降解，为避免过酸、过碱对DNA双链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH值4.0-10.0的条件下进行。防止基因组DNA的生物降解，主要是DNase降解基因组DNA，DNase需二价金属阳离子如Mg2+等的激活，可用EDTA等金属离子螯合剂螯合Mg2+以YZDNase的活性。减少物理因素对DNA的降解，物理降解因素主要包括机械剪切力（如剧烈振荡、搅拌等），细胞突然置于低渗液中导致的细胞爆炸式破裂，DNase大量释放，样品反复冻融和高温等。4、DNA洗脱收集DNA的洗脱效率取决于以下重要因素：洗脱液成分：采用硅基质膜吸附的DNA，可将DNA在低盐高pH值条件下洗脱下来。pH值在7.0-8.5之间洗脱效率较高，pH值低于7.0则洗脱效率很低。一般基因组提取试剂盒中的洗脱缓冲液就是TE（pH8.0），既为DNA从硅基质膜上洗脱下来提供良好的pH环境，其中的EDTA又能保证DNA不被DNase降解，同时由于EDTA浓度非常低，对核酸内切酶、DNA聚合酶的影响非常微弱，不影响后续实验，可放心使用。洗脱液体积：当洗脱液体积小于30ul时，洗脱效率很低且不稳定；当洗脱液体积在50-200ul时，洗脱效率稳定在80-90，并可保证得到Zda产量，因此洗脱液体积不能小于30ul。加洗脱液部位：100-200ul洗脱液能完全覆盖硅基质膜，DNA的洗脱量可得到保证，但当洗脱液体积较少如30-50ul时，须在硅基质膜中间部分悬空滴加洗脱液，以确保少量的洗脱液能完全覆盖硅胶膜。洗脱液的温度：在加洗脱液之前，先将洗脱液在60-75℃水浴中预热10分钟，可有效提高DNA的洗脱效率。洗脱时间和次数：加入预热的洗脱液后，可在室温放置2-5分钟使DNA完全溶解在洗脱液里通过离心而洗脱下来。同时可进行二次或三次洗脱，即将前次洗脱下来的洗脱液再上柱、离心，使前次没有洗脱下来的DNA再次溶解在洗脱液里，从而提高DNA的产量。5、DNA的定量及检测提取得到的DNA*片段需从分子质量、浓度、纯度等方面进行检测，从而判断DNA质量。用琼脂糖凝胶电泳分析DNA分子质量：得到的基因组DNA*片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。Solarbio公司的基因组DNA提取试剂盒提取的不同材料基因组DNA*片段大小一般在50kb左右，能很好地满足后续试验的要求。通常用琼脂糖凝胶电泳分析DNA分子质量时，以溴酚蓝为示踪染料，EB染色，紫外观察，并与DNA分子量标准对照即可判断所提DNA的平均分子量。高质量的基因组DNA应显示为单一条带，如DNA降解则表现为弥散条带。用紫外分光光度计检测DNA浓度和纯度：浓度测定：DNA在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50ug/ml双链DNA。以下简单介绍OD260的测定方法：所提基因组DNA样品=100ul进行OD260值测定的待测样品=20ul所提基因组DNA样品+180ulTE=200ulDNA稀释倍数=200ul/20ul=10倍如200ul待测样品OD260值=0.2待测样品浓度（即100ul基因组DNA样品浓度）=50ug/ml×OD260值×稀释倍数=100ug/ml所提100ul基因组DNA样品总量=100ug/ml×100ul=10ugDNA纯度测定：一般用OD260/OD280值检测DNA样品的纯度。正常OD260/OD280值约为1.7-1.9，说明DNA纯度较好；若OD260/OD280值小于1.7，说明可能有蛋白污染；若OD260/OD280值大于2.0，说明可能有RNA污染或DNA已经降解。注：因为pH值和离子会影响光吸收值，因此洗脱时如不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，OD260/OD280值会偏低，但并不表示纯度低。6、DNA的储存储存溶液：DNA为两性解离分子，在碱性条件下较稳定，因此一般用TE（pH8.0）保存。TE的成分为：10mMTris-HCl（Tris与盐酸形成强的缓冲对）；1mMEDTA（乙二胺四乙酸，能螯合二价金属阳离子，YZDNase的活性）；pH8.0（碱性条件可减少DNA的脱氨作用，防止降解）。ddH2O的正常pH值为7.0，可作为DNA的储存液，但有些实验室制备的ddH2O呈酸性（pH值小于7.0），这不仅影响DNA的洗脱效率，而且导致长时间保存的DNA容易发生降解。因此建议用TE作为DNA的长期储存液。储存条件：为避免DNA降解，提取的DNA应先进行分装，然后置于-20℃或-70℃保存，同时注意避免反复冻融造成DNA降解。[详细]
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2024-09-29 11:52
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2018-09-04 10:00
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