PCR的常见问题

聚合酶链式反应简称PCR（Polymerase Chain Reaction） (又称：多聚酶链式反应) PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。下面就让小编为大家介绍一下PCR的常见问题以及yi疗应用。

PCR的常见问题

为什么完全没有PCR扩增产物？

1.在加样的时候出现失误或者试剂的质量出现问题，从而造成反应体系不完整。

2.在反应体系里存在聚合酶yi制剂或者聚合酶失活。

3.PCR基因扩增仪的的温度没有得到精确的控制。

4.模板DNA发生降解。

5.引物或反应温度设计不合理。

6.靶片段有过高的GC含量或者扩增对象的长度过长。

为什么会有多条非特异性条带出现？

1.反应体系受到污染。

2.引物的特异性不是很好。

3.没有选择合适的退火温度

为什么PCR产物很少？

1.聚合酶活性过低。

2.循环次数偏低。

3.模板DNA浓度过低。

为什PCR产物出现片状拖尾？

1.DNA聚合酶过多或者酶活性过低。

2.dNTP和镁离子的浓度过高。

3.退火温度过低，循环次数过多。

4.模板DNA不纯或者模板DNA用量过大。

5.引物的特异性不是很好，引物间形成二聚体造成非特异性扩增。

yi疗应用

1.病原体检测

目前，采用荧光定量PCR检测技术能够定量测定淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体。荧光定量PCR检测技术灵敏度高、取样少、快速简便。

2.产前诊断

直到现在人们依然无法zhi疗遗传性物质改变引起的遗传性疾病，只能通过产前监测，减少病婴出生，对各类遗传性疾病的发生的预防，使用实时荧光定量PCR检测无创伤，易被接受。

3.肿瘤基因检测

实时荧光定量PCR不但能有效地检测到基因的突变，而且可以准确检测癌基因的表达量。随着与肿瘤相关的新基因的不断发现，荧光定量PCR技术将会在肿瘤的研究中发挥更大的作用。