「最强色谱大脑」第四期决战！液相系统大师赛

《HPLC高效液相色谱基础能力培训》

第7讲&第8讲

《生物制药领域中色谱分析的

基础认知与应用全景》系列

最强色谱“大脑”

随机好礼

参赛达人奖

1. 反相色谱中添加TFA的主要作用

答案：B

陷阱排除：

A：TFA在低波长（<220nm）有强吸收，降低灵敏度。

C：TFA对粘度影响可忽略。

D：溶解度由溶剂极性决定，TFA无直接贡献。

2. 粘度最低的溶剂组合

答案：B

乙腈-水（50:50）粘度≈0.34 cP，显著低于：

• 甲醇-水（50:50）：0.54 cP

• 四氢呋喃-水（30:70）：0.55 cP

• 异丙醇-水（20:80）：1.8 cP

应用意义：

低粘度溶剂可支持更高流速（如3mL/min）快速分离。

3. 四元泵的核心优势

答案：B

四元泵有四个独立溶剂通道，可在线混合四种流动相（如水/乙腈/甲醇/缓冲盐），实现复杂梯度（如三元梯度+等度缓冲）。二元泵仅支持两种溶剂混合。

陷阱排除：

A：耐压性取决于泵头材质，与溶剂通道数无关。

C：脉动噪音由泵设计（如主动阀）决定。

4. 缓冲盐浓度过高的风险

答案：B

高浓度缓冲盐（如>100mM）在高有机相比例或低温下易析出结晶，堵塞：

• 色谱柱筛板

• 检测器流通池

• 泵单向阀

正确做法：

缓冲盐浓度通常为5-50mM，并避免使用磷酸钠（低温易析出）。

5. 流动相脱气的根本目的

答案：B

溶解氧在流动相中形成微气泡，导致：

• 泵脉动（压力波动＞10%）

• 检测器基线毛刺（气泡通过流通池散射光线）

• 保留时间漂移

脱气方法：氦气鼓泡、在线真空脱气机。

6. 高压/低压混合系统的本质区别

答案：B

梯度精度：高压混合优于低压混合（尤其低流速时）。

7. 进样针携带（Carryover）主因

答案：B

残留样品吸附在进样针内壁或针尖，因清洗不充分（如清洗液体积不足、清洗次数少）导致下次进样污染。

解决方案：

• 增加针内外壁清洗（如用强溶剂冲洗）

• 使用涂层进样针（如特氟龙涂层）减少吸附

8. 反相色谱最常用流动相组合

答案：A

乙腈-水是RPLC黄金组合，因：

• 低粘度（乙腈0.34 cP vs 甲醇0.54 cP）

• 强洗脱力（乙腈洗脱强度≈甲醇的2倍）

• 低紫外截止波长（乙腈190nm，甲醇205nm）

陷阱排除：

B：正己烷-异丙醇属正相色谱

D：超临界CO?用于SFC

9. 缓冲盐选择关键因素

答案：A, B, C, E

A. pKa匹配：缓冲盐pKa需在目标pH±1内（如pH 7.0选磷酸盐pKa=7.2）。

B. 紫外截止波长：磷酸盐（<200nm）透明，醋酸盐（210nm）可能干扰。

C. 溶解度：低温下柠檬酸盐易析出，铵盐更稳定。

E. 固定相兼容性：硅胶柱忌用高pH磷酸盐（溶解硅胶）。

排除D：颜色指示剂仅用于pH试纸，非色谱流动相。

10. 泵压力异常升高的原因

答案：A, B, C

A. 在线过滤器堵塞：样品颗粒或微生物堵塞滤芯。

B. 色谱柱筛板污染：样品基质积累堵塞筛板（常见于生物样品）。

C. 流动相盐析/微生物滋生：高盐流动相析出结晶，或长菌堵塞管路。

排除项：

D：检测器灯能量不足导致信号↓，不影响压力。

E：进样针密封磨损会导致漏液压力降低。