原发性醛固酮增多症的临床应用新方案 — 同时检测血浆中的血管紧张素I&II和醛固酮

目前病因较为明确的继发性高血压中，原发性醛固酮增多症(Primary Aldosteronism, PA)是发病率较高的病因之一，且与原发性高血压患者相比，PA患者心、脑等靶器官损害更为严重，所以PA的早期诊断至关重要。

肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)由一系列肽类激素及相应酶组成的重要体液调节系统（如下图所示），主要包括：肾素、血管紧张素原、血管紧张素和醛固酮；主要功能是调节和维持人体血压、水、电解质的平衡。在这个循环系统中肾素催化血管紧张素原转化为血管紧张素I(Ang I)的速率，就是血浆肾素活性。《原发性醛固酮增多症诊断治 疗的专家共识》推荐将血浆醛固酮/肾素活性的比值(ARR)作为原发性醛固酮增多症的首 选筛查指标。而血管紧张素II(Ang II)又是非常具有生物活性的指标，最近也受到越来越多的关注。

图1. 肽类激素及相应酶组成的重要体液调节系统。

临床上主要采用放射免疫和化学发光免疫法检测Ang I&II和醛固酮，但是由于免疫法存在交叉干扰和灵敏度差等原因，近年来特异性更强、灵敏度更高的LC-MS/MS方法也逐渐开始应用于Ang I&II和醛固酮的定量检测。沃特世在2013年就开发了血浆中醛固酮的临床检测方法，已经有很多临床实验室采用该方案进行样本检测。但是目前Ang I、Ang II和醛固酮分别采用不同的样本前处理方法、不同的液相质谱方法分别检测，不仅耗时，而且成本很高。但如要使用LC-MS/MS技术同时检测这3个指标会存在以下难题：

• Ang I&II是多肽类物质，醛固酮是类固醇小分子，极性差别较大；

• 醛固酮是负离子，Ang I和Ang II是正离子，液相条件要兼顾；

• Ang I的孵育过程不能影响Ang II和醛固酮的浓度；

• SPE的步骤要兼顾Ang I& II和醛固酮的保留和净化。

为了同时解决以上困难，沃特世临床团队和北京金域医学检验团队共同做了大量的优化和对比实验，最 终确定了一个可以稳定重现的整体解决方案。200 µL血浆，一次样本前处理，5 min液相方法，使用Xevo TQ-S IVD或Xevo TQ-XS IVD同时定量分析Ang I、Ang II和醛固酮，大大降低了分析时间和检测成本。该方法已在《临床检验杂志》发表：

我们分别使用 UPLC I-Class Xevo TQ-XS IVD和 Xevo TQ-S IVD系统对该方法进行了详细的方法学验证，均能满足临床检测的要求。

图3. ACQUITY UPLC 1-Class - Xevo TQ-XS IVD系统。

图4. ACQUITY UPLC 1-Class - Xevo TQ-S IVD系统。

详细的实验方案和方法验证数据可以参考文献具体内容，方法中使用到的相关耗材如下表：

该方法的定量限和实际样本的检测色谱图(ACQUITY UPLC I-Class - Xevo TQ-S IVD)如下图:

图5. LOQ的色谱图（左）和血浆样本的色谱图（右）。

结论 

使用Waters ACQUITY UPLC I-Class - Xevo TQ-S IVD和Xevo TQ-XS IVD系统结合Oasis MAX μElution SPE的样品前处理方法，建立了血浆样品中Ang I、Ang II和Aldo的同时，高灵敏度的定量分析方法。Ang I、Ang II和醛固酮的定量限分别是2 pg/mL、200 pg/mL和20 pg/mL，线性范围可以覆盖临床检测所需要的参考范围。低中高浓度的加标回收率在91 - 103 %之间，批内和批间精密度均<8%，保证了样品检测的准确性和稳定性。此外，该方法还可以辅助原发性醛固酮增多症的诊断和治 疗。