细胞培养中的常见问题及解决方法

细胞培养也叫细胞克隆技术，指的是细胞在体外条件下的生长，在培养的过程中细胞不再形成组织，培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都要生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞可能会受一些其他因素的影响，从而导致在细胞培养过程中出现各种各样的问题，常见问题有哪些呢？

一、悬浮细胞成簇
可能原因：

•培养液中含钙、镁离子；

•支原体污染；

•蛋白酶过度消化使得细胞裂解；

•DNA污染；

解决方法：

•用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液；

•分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物；

•用DNase I处理细胞

二、培养细胞不贴壁
可能原因：

•胰蛋白酶消化过度；

•支原体污染；

•培养基pH值过碱（NaHCO3分解）；

•细胞老化；

•接种细胞起始浓度太低或太高。

解决方法：

•缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度；

•分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物；

•使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2；

•启用新的保种细胞；

•调节最 佳接种细胞浓度。

三、培养细胞生长缓慢
可能原因：

•由于更换不同培养液或血清；

•培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏；

•培养物中有少量细菌或真菌污染；

•试剂保存不当；

•接种细胞起始浓度太低；

•细胞已老化；

•支原体污染 。

解决方法：

•比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液；

•换入新鲜配置培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子；

•用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物；

•血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，需在1周内用完；

•增加接种细胞起始浓度；

•换用新的保种细胞；

•分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

四、培养细胞死亡
可能原因：

•培养箱内无CO2；

•培养箱内温度波动太大；

•细胞冻存或复苏过程中损伤；

•培养液渗透压不正确；

•培养液中有毒代谢产物堆积。

解决方法：

•检测培养箱内CO2；

•检查培养箱内温度；

•取新的保存细胞种；

•检测培养液渗透压；

•换入新鲜培养液。