人抗中性粒/中心体抗体(ACA)ELISA实验原理与步骤

　　人抗中性粒/中心体抗体(ACA)ELISA实验原理与步骤

　　人抗中性粒/中心体抗体(ACA)ELISA实验原理是采用双抗体夹心法或双抗原夹心酶联免疫法，通过测定样本中ACA的浓度或存在与否来进行实验‌。具体原理及步骤如下：

　　实验原理

　　‌双抗体夹心法‌：

　　用纯化的人抗中性粒/中心体抗体(ACA)抗体包被微孔板，制成固相抗体‌。

　　向包被单抗的微孔中依次加入待测样本中的抗中性粒/中心体抗体(ACA)，这些抗体与固相抗体结合。

　　再加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的抗中性粒/中心体抗体(ACA)抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。

　　经过洗涤后，加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

　　颜色的深浅与样品中的抗中性粒/中心体抗体(ACA)浓度呈正相关，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中ACA的浓度‌。

　　‌双抗原夹心酶联免疫法‌：

　　用纯化的抗中性粒/中心体抗体(ACA)抗原包被微孔板，制成固相抗原。

　　固相抗原与样品中的抗中性粒/中心体抗体(ACA)相结合。

　　经过洗涤后，再加入HRP标记的抗中性粒/中心体抗体(ACA)抗原，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物。

　　洗涤后加底物TMB显色，颜色的深浅与样品中ACA的存在量相关。

　　用酶标仪测定OD值，并与CUTOFF值相比较，判定标本中ACA的存在与否‌。

　　实验步骤

　　虽然不同品牌和型号的ELISA试剂盒在具体操作步骤上可能有所不同，但一般包括以下基本步骤：

　　‌样本处理‌：根据试剂盒说明书要求，对血清、血浆、尿液或组织等样本进行适当处理，如离心、稀释等‌。

　　‌加样‌：将处理后的样本加入微孔板中，同时设置阴性对照、阳性对照和空白对照。

　　‌温育‌：将微孔板置于恒温箱中，按说明书要求的时间进行温育，使样本中的抗体与固相抗体或抗原充分结合。

　　‌洗涤‌：温育后，用洗涤液洗涤微孔板，去除未结合的抗体和其他成分。

　　‌加酶标抗体/抗原‌：向微孔板中加入HRP标记的抗体或抗原，形成抗体-抗原-酶标抗体/抗原复合物。

　　‌再温育‌：再次进行温育，使酶标抗体/抗原与已结合的抗体充分反应。

　　‌洗涤‌：再次洗涤微孔板，去除未结合的酶标抗体/抗原。

　　‌显色‌：向微孔板中加入底物TMB，TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成黄色。

　　‌测定‌：用酶标仪在450nm波长下测定各孔的OD值，根据标准曲线或CUTOFF值计算或判定样本中ACA的浓度或存在与否。

　　以上信息仅供参考，具体实验步骤和结果解释应参照所用试剂盒的说明书进行。