小鼠短链脂肪酸(SCFA)ELISA实验步骤‌

　　小鼠短链脂肪酸(SCFA)ELISA实验步骤‌

　　(简洁操作版 | 关键步骤加粗提示)

　　‌ 一、样本前处理‌

　　‌粪便/肠道内容物‌：

　　取 ‌50-100mg‌ 样本 → 加 ‌1mL PBS‌ 匀浆 → ‌3000rpm离心10min‌ → 取上清。

　　‌血清‌：直接使用(避免反复冻融)。

　　‌组织‌：

　　按 ‌1:9(重量/体积)‌ 加PBS匀浆 → 离心后取上清。

　　‌二、标准品准备‌

　　复溶冻干标准品 → ‌梯度稀释为0、5、10、20、50、100 μmol/L‌(共6个浓度)。

　　‌ 三、实验流程‌

　　‌步骤‌‌操作要点‌

　　‌1. 加样(50μL/孔)‌➤ 标准品孔：对应浓度标准品

　　➤ 样本孔：待测样本上清

　　➤ 空白孔：样本稀释液

　　‌2. 加酶标试剂‌➤ 每孔加 ‌50μL HRP酶标试剂‌(空白孔不加)→ ‌37℃孵育30min‌

　　‌3. 洗板‌➤ 甩干液体 → 每孔注满洗涤液 → 静置30s弃去 → ‌重复洗板5次‌ → 拍干

　　‌4. 显色‌➤ 每孔加 ‌显色液A/B各50μL‌ → ‌37℃避光15min‌(严格计时!)

　　‌5. 终止与检测‌➤ 加 ‌50μL终止液‌ → 立即测 ‌OD450nm‌ 值

　　‌ 四、关键注意事项‌

　　‌洗板‌：必须彻底拍干残留液体，否则导致OD值偏高!

　　‌显色时间‌：超过15min可能显色过深，需立即终止。

　　‌样本稀释‌：若浓度超出标准曲线范围，需调整稀释倍数后重测。

　　 五、数据分析‌

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，用‌四参数拟合‌绘制标准曲线。

　　代入样本OD值计算浓度 → ‌结果×稀释倍数‌ = 实际SCFA含量。

　　‌提示‌：不同品牌试剂盒细节可能有差异，建议以实际说明书为准!

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