Elisa实验—ELISA板包被原理
ELISA板包被是将抗原或抗体固定到固相载体(如聚苯乙烯微孔板)表面的关键步骤,其原理主要依赖物理吸附和化学偶联两种方式:
物理吸附(被动包被)
通过疏水作用、静电作用、氢键和范德华力等非共价力实现。聚苯乙烯表面疏水性较强,蛋白质在碱性缓冲液(如pH 9.6的碳酸盐缓冲液)中易吸附。适用于大多数蛋白质,但小分子(如短肽、半抗原)吸附能力较弱。
化学偶联(主动包被)
使用交联剂(如EDC/NHS)将蛋白质的氨基或羧基与微孔板表面的活性基团共价结合。适用于小分子抗原、多糖、脂类等不易吸附的分子。
包被步骤
稀释:按说明书将抗原/抗体稀释至适当浓度。
涂布:加入包被液混合后涂布于酶标板。
洗涤:去除未吸附的分子,确保特异性结合。
包被质量直接影响ELISA的准确性和灵敏度,需优化条件(如蛋白浓度、缓冲液pH、孵育时间)。
注:以上仅供参考,本产品仅供科研使用,不作为实际数据,实验需严格遵循说明或咨询技术老师。
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