人血清中小分子蛋白质分离电泳方法改进
人血清中小分子蛋白质分离电泳方法改进
建立一种灵敏易行分离分子量＜10 000 Da低丰度蛋白质的电泳方法。
实验方法:用Hitrap Blue层析柱去除血清中白蛋白，用U9对血清样品进行变性处理，采用改进后的方法进行染色。
结果:经去除血清中的白蛋白、对样品进行变性处理及改进染色方法后，分辨率和灵敏度明显提高，可有效分离10 000 Da以下的小分子蛋白质。结论 改进后的电泳方法，不仅简便灵敏，而且还有利于蛋白质的洗脱回收。
患者血清中某些小分子蛋白标志物可以用于疾病监测和快速诊断，但分离分子量＜10000Da的小分子蛋白质面临很多问题。三(羟甲基)甲基甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶电泳(TricineSDSPAGE)是目前一种有效分离小分子蛋白、多肽的电泳方法，可以用于分离小至1kDa的小分子肽。但其分离效果与样品处理、样品中目的蛋白含量以及染色方法等密切相关。文献报道，使用TricineSDSPAGE分离小分子蛋白的样品多为蛋白质标准品。作者在分离小分子肽的实验中发现，根据文献报道的方法，对于分离蛋白标准品或高丰度蛋白效果尚可，但直接用于分离人血清中低丰度的小分子蛋白效果并不理想。因此，作者在样品的处理、染色等方面进行改进，建立了一种效果理想、简便灵敏的分离人血清中小分子蛋白质的方法。
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