文末报名 | 这个521，Cytiva X 佰傲谷与你共探细胞治疗中的基因编辑

细胞治疗，“以生命治愈生命”，像是一场精心策划的浪漫邂逅，将患者自身的细胞或捐赠者的细胞进行体外操作，如基因编辑或扩增，再输回患者体内以治疗疾病。

而基因编辑，则是对生物体基因组特定目标进行修饰的过程，它精准地修饰着生物体的基因组特定目标，改变着遗传信息，塑造着新的表现型特征。

病毒转染，作为基因编辑领域的“老牌明星”，历经时间考验，不断突破，魅力不减。它利用病毒作为载体，将外源基因导入目标细胞，实现基因的转移和表达。

在细胞治疗中，病毒转染被广泛应用于CAR-T细胞疗法的制备过程中，通过插入CAR（嵌合抗原受体）基因，使T细胞获得靶向肿瘤抗原的能力，从而精准地杀伤癌细胞。

病毒载体能够高效地感染细胞，实现外源基因的高水平表达，不受细胞分裂状态的限制，适用于多种类型的细胞。

C-pro的程序软件SpinOculation提供了一种基于封闭系统的、自动化的LVV转导方法，其转导效率和其他细胞表征与静置转导或手动的开放式操作相比有一定的提升。

而该程序提供了开放式，灵活的参数设置，也为优化实验，进一步提升工作效率提供了潜力。这一方法也在NIH的临床转化中心得以应用，成为其生产流程的一部分，为多个临床试验提供助力。

图1：影响转导效率的常见因素概览。其中大部分因素均可以通过SpinOculation程序标准化

LNP是完全合成的脂质制剂，用于在将RNA递送到靶细胞之前包封和保护RNA免受核酸酶降解。RNA-LNP复合物在结构上与低密度脂蛋白（LDL）类似，可以利用LDL的内源性摄取途径，通过受体介导的内吞作用进入靶细胞。

这种温和的摄取机制能够成功和高效地进行T细胞基因工程。临床阶段基因编辑技术前沿企业Intellia Therapeutics发布的数据显示，在他们的同种异体TCR-T和CAR-T项目中，有效地使用LNP技术对T细胞递送CRISPR/Cas9基因编辑物。

Cytiva的PNI NanoAssemblr仪器与GenVoy-ILM T Cell Kit for mRNA（可用于NanoAssemblr Spark和Ignite仪器）等专用试剂盒配套使用，为研究人员提供所需的工具，帮助他们再自己的实验室内建立可靠、可扩展的离体基因递送方法。

mRNA-LNP可以轻松无缝地整合到标准的原代T细胞培养工作流程中，以促进从概念到临床实践的下一代CAR-T细胞疗法的生产。

图2：LNP易于整合到离体CAR-T细胞基因工程策略中，包括基因表达 (a)、单基因敲除 (b)、双基因敲除 (c) 和多步骤基因敲除和表达 (d)

目前，基因组编辑技术已在多种疾病，如单基因遗传病、眼科疾病、肿瘤及自身免疫性疾病的治疗中得到应用。

CRISPR/Cas是目前广泛应用的基因编辑技术，但是仍然会因为编辑效率、脱靶效应以及HDR插入效率等问题而受到挑战。

IDT出品的Alt-R CRISPR基因编辑系统，在降低整体脱靶率的同时实现高效的靶点切割，并能通过优化的HDR设计策略及试剂组合实现高效率的基因插入。

图3： CRISPR/Cas基因组编辑技术原理