ELISA试剂盒实验步骤及注意事项

从而保证试验结果的特异性与稳定性ELISA试剂盒是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的GX催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物。

在ELISA试剂盒中一般有4次加样：加标本、加酶结合物、加底物和加终止液。加标本时必须每份标本使用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶结合物、底物和终止液时则不需更换吸嘴。

3．在成批手工检测中，还应注意操作时差的影响。加样及混匀时间的差异，使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致，对竞争法及定量检测影响很大，不注意可能会导致错误结果或定量不准。

4．洗涤是ELISA试剂盒操作过程中决定实验成败的一个关键步骤。目的是除去未结合的免疫反应物，终止抗原抗体反应，除去标本中与反应无关的成分、游离的酶标物以及反应过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手工洗板，前者洗涤质量较好，各反应孔洗涤效果均一，批内、批间差异小，手工洗板应注意控制各孔洗涤效果，差异不宜太大。

5．准确判定结果须使用ELISA试剂盒测读仪（酶标仪），比色法判读可选择单波长或双波长，根据反应液颜色的不同选用不同波长的滤光片，以空白孔校零测定反应孔的吸光度值（A值）。酶标仪具有良好的重复性。