看似简单的转化也是分子克隆中关键的一环

来源：翌圣生物科技(上海)股份有限公司更新时间：2022-05-23 00:00:00 阅读量：31

导读：转化是分子克隆的关键步骤，其目标是产生重组DNA分子的多个拷贝。在转化过程中，质粒DNA被引入到适当的菌株中，以便菌株可以复制目标序列，以用于后续进一步的分析或操作。转化通常有两种方法，分别为电转化和化学转化。化学转化是分子克隆实验中是最常用的转化方法。

2022克隆王大赛数据审核阶段明天（5月20日）就截止啦。5月23日，克隆王大赛大众投票正式开启，投票从5月23日到5月27日，持续5天，同学们赶紧准备为自己拉票吧~

说到投票，就不得不提投票规则，同学们注意啦！在投票期间，每天每人仅能给1份实验数据投1票，最多可以给5份实验数据投票。

小翌温馨提醒：请勿使用刷票软件刷票，一经发现，将取消参赛资格。

投票页面

这时，肯定有同学会问，那去哪里投票呢？

5月23日，投票渠道会在【翌圣生物YEASEN】公众号菜单栏正式开放，记得保持关注哦~

说完投票，小翌带大家进入今天的主题——转化。

转化是分子克隆的关键步骤，其目标是产生重组DNA分子的多个拷贝。在转化过程中，质粒DNA被引入到适当的菌株中，以便菌株可以复制目标序列，以用于后续进一步的分析或操作。转化通常有两种方法，分别为电转化和化学转化。化学转化是分子克隆实验中是最常用的转化方法。

化学转化实验步骤

其核心步骤主要分为三步：

① 质粒DNA进入细胞；

② 细胞恢复；

③ 细胞接种培养。

质粒DNA进入细胞

常见的化学感受态细胞通常采用CaCl₂法进行制备。感受态细胞的细胞膜磷脂双分子层因为钙离子的存在形成液晶结构，细胞壁的通透性发生变化，外源带负电荷的DNA会和带正电荷的钙离子吸附在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基－磷酸钙复合物。42℃条件下，感受态细胞进入应激状态，细胞膜发生变化，出现许多间隙，吸附的DNA进入细胞。热冲击后，在低温条件下，间隙收缩。

图片来源：Revisiting the Mechanisms Involved in Calcium Chloride Induced Bacterial Transformation

注意事项：

1. 为保证良好的实验结果，建议选用转化效率在10⁷cfu/ug以上的感受态细胞；

2. 加入的外源DNA量过多或者体积过大会使转化效率下降，建议加入体积不超过感受态细胞的十分之一；

3. 细胞避免反复冻融，长时间反复开关冰箱也会造成感受态细胞转化效率的下降；

4. 完成热冲击后，需迅速将感受态细胞置于冰上，保证DNA完全进入感受态细胞中。

细胞恢复

转化后的细胞需在无抗生素的液体培养基中进行培养，以保证外源DNA表达相关抗生素抗性基因，提高后续涂板细胞的活力和克隆效率。

注意事项：

1. 该过程需在超净台中进行，无抗生素的培养基受到杂菌污染会影响转化效率，给后续实验造成不便；

2. 恢复时采用的液体培养基建议在37℃下预热，以保证细胞的恢复和生长，提高克隆阳性率；

3. 恢复的时间和转速根据所选用的感受态细胞而来，不同的感受态最优条件会有不同，建议参照商品说明书。

细胞接种培养

细胞的均匀分布对于菌落分析和后续筛选至关重要，选用灭过菌的涂布棒或者玻璃珠进行细胞扩散，需保证在细胞悬浮液干燥之前，完成细胞的均匀扩散。

注意事项：

1. 金属制涂布棒灭菌时若采用酒精灯灼烧灭菌，需等待涂布棒冷却后进行涂布接种；

2. 避免使用长时间存放的培养板，以保障抗生素活性、菌株生长营养所需；

3. 在细胞接种之前，应将培养基预热至适当的生长温度并且无冷凝水，以防止污染和混合菌落；

4. 避免长时间孵育。长时间孵育会导致大菌落融合，并且会在大菌落周围出现卫星菌落。

除了要了解实验步骤和注意事项外，选好感受态细胞也很重要！

翌圣生物利用改良的生产菌株，采用严格的生产工艺，制备了高效、稳定、适用性广的高效感受态（＞10⁸ cfu/ug DNA）。另外，-80℃超低温冰箱保存，全程“三明治”结构的十斤干冰运输。多重保障帮您解决转化效率低的问题，助您轻松做转化，顺利做克隆。

产品优势

转化效率高：＞10⁸cfu/ug DNA

批次间稳定：批次间质量对比无差异

无杂菌污染：涂板培养无杂菌

无抗性偏好：各种抗生素均可适用

冷链运输：十斤干冰运输

产品性能

1. 感受态细胞批次间稳定强，转化效率高（＞10⁸cfu/ug DNA）

图1. TOP10、DH5α和BL21三种感受态不同批次的转化效率稳定。

2. 感受态细胞无杂菌污染

图2. 感受态细胞转化效率为＞10⁸cfu/ug DNA（A/B），感受态细胞涂布卡纳、羧苄平板上无杂菌污染（C/D/E/F）。

订购信息

应用场景	产品名称	货号	规格
高效感受态	TOP10 Chemically Competent Cell Top10化学感受态细胞	11801ES80	10×100 μL
	DH5α Chemically Competent Cell DH5α化学感受态细胞	11802ES80	10×100 μL
	BL21 (DE3) Chemically Competent Cell BL21 (DE3)化学感受态细胞	11804ES80	10×100 μL
一步法快速重组克隆	Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit一步法快速克隆试剂盒	10911ES20	20 T

	Hieff Clone® Plus Multi One Step Cloning Kit多片段一步法快速克隆试剂盒	10912ES10	10 T

	Hieff Clone® Universal One Step Cloning Kit通用型一步法快速克隆试剂盒	10922ES20	20 T

高保真酶83倍Taq	Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶	10153ES60	100 U
	2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix(With Dye) 高保真酶预混液	10154ES03	1 mL

分享到：
扫码分享

翌圣生物科技(上海)股份有限公司

400-611-1883

留言咨询

主营产品：实验仪器 PCR仪器自动核酸提取仪实验室常规仪器 PCR试剂

产品中心技术文章行业资讯

上一篇: 转染试剂实验数据火热征集中,反馈即送精美礼品

下一篇: 好消息！翌圣已完成T7 RNA polymerase的DMF备案

参与评论

登录后参与评论

全部评论(0条)

登录或新用户注册

微信登录
密码登录
短信登录

请用手机微信扫描下方二维码
快速登录或注册新账号

微信扫码，手机电脑联动

注册登录即表示同意《仪器网服务条款》和《隐私协议》

相关产品推荐（★较多用户关注☆）

梯度PCR仪(单模块) NA-1梯度PCR仪 80490ES
报价：面议已咨询 128次
梯度PCR仪(双模块) NA-2双槽梯度基因扩增仪(80491ES)
报价：面议已咨询 152次
32通道自动化核酸提取仪 Auto-Pure32A核酸提取纯化仪(80500ES)
报价：面议已咨询 143次
48通道自动化核酸提取仪 AP-48核酸自动制备系统(80511ES)
报价：面议已咨询 121次
96通道自动化核酸提取仪 AP-96N核酸自动制备系统(80510ES)
报价：面议已咨询 128次
Celemetor实时荧光定量PCR分析Block/Tube双操作系统(80520ES)
报价：面议已咨询 119次
梯度PCR基因扩增仪(单模块) ES-PCR96-1梯度PCR基因扩增仪
报价：面议已咨询 134次
翌圣ES-PC30微孔板离心机可调节转速离心机
报价：面议已咨询 121次

你可能还想看

资讯
技术
百科
应用

看似简单的转化也是分子克隆中关键的一环

转化是分子克隆的关键步骤，其目标是产生重组DNA分子的多个拷贝。在转化过程中，质粒DNA被引入到适当的菌株中，以便菌株可以复制目标序列，以用于后续进一步的分析或操作。转化通常有两种方法，分别为电转化和化学转化。化学转化是分子克隆实验中是最常用的转化方法。

2022-05-2331阅读
选择一款优质的荧光定量PCR仪也是实验成功的关键

2023-10-30109阅读
不止搬迁设备这么简单，这也是一次让实验室焕然一新的机会

2024-07-16114阅读
安全守护不容疏忽的一环——化妆品

2020-12-15559阅读
丹纳赫生命科学“转化医学的关键对话”在京成功举办

2023-04-031584阅读丹纳赫生命科学

碘元素测定：守护全民碘健康的关键一环

让分析检测更简单

2025-04-1076阅读
QPix：合成生物学自动化流程关键一环

QPix：合成生物学自动化流程关键一环

2025-07-11104阅读
城市道路积水监测技术：智慧城市交通管理的关键一环

2024-03-0752阅读
探索未知电穿孔技术在转基因和动物克隆中的应用

电穿孔技术在转基因和动物克隆中的应用。电穿孔技术利用脉冲电场改变细胞膜的状态和通透性，从而实现DNA导入细胞以及细胞融合的目的。

2024-10-2962阅读电穿孔仪细胞电穿孔仪基因导入仪
选择一款优质的荧光定量PCR仪也是实验成功的关键

2023-11-2090阅读

大肠杆菌转化实验

粘附在细菌细胞表面的质粒DNA在42摄氏度下经过短时间的热击处理，为DNA的吸收起到促进作用，之后于非选择培养基中培养一代，等到质粒上所带的抗菌素基因表达，就能够生长在还有抗菌素的培养基中了。

2025-10-221870阅读
气相分子光谱法的介绍

气相分子吸收光谱法(简称 GPMAS)是基于被测成分所分解成的气体对光的吸收强度与被测成分浓度的关系遵守光吸收定律这一原则来进行定量测定的;根据吸收波长的不同,也可以确定被测定的成分而进行定性分析。

2025-10-182685阅读
制备色谱仪简单介绍

制备色谱仪为一种在食品科学技术领域进行使用的分析仪器。制备色谱是指通过对色谱技术的采用进行纯物质的制备，也就是对一种或多种色谱纯物质进行分离、收集。

2025-10-18535阅读
空气发生器的简单故障排除和主要参数

空气发生器通过压缩机对空气（或其他气体）进行压缩，储存在储气罐中，以便使用。主要有压缩机、储气罐、过滤器、干燥室等主要部分组成。

2025-10-232483阅读空气发生器
分子杂交核酸探针的制备方法

分子杂交是指使单链核酸碱基序列确定的技术。待测单链核酸与已知序列的单链核酸（叫做探针）间通过碱基配对使可检出的双螺旋片段形成为分子杂交的基本原理。

2025-10-211402阅读

理解HAST：为何它是高效可靠性评价的关键一环

在电子产品迭代飞速的今天，传统的温湿度试验（如85℃/85%RH）耗时长达数千小时，已难以满足研发周期需求。HAST技术应运而生，它通过在严苛的非饱和高压蒸汽环境下，大幅加速水分渗透

2025-11-2660阅读 HAST非饱和高压老化试验箱非饱和高压加速老化试验箱高压蒸煮老化试验箱
技术解析 | 塑料也是合金么？

在处理高分子材料上来讲，ZM300的“快、准、狠”适合高分子粉末配方的开发。

2024-09-18264阅读粉末样品制备离心粉碎仪合成材料
合成生物学前沿 | 非靶向代谢组学解析酿酒酵母一碳转化调控关键靶点

2023-05-04550阅读
简单移液器的制作方法

2013-12-08646阅读
硝酸铵转化

2012-01-09707阅读

版权与免责声明

①本文由仪器网入驻的作者或注册的会员撰写并发布，观点仅代表作者本人，不代表仪器网立场。若内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们立即通知作者，并马上删除。

②凡本网注明"来源：仪器网"的所有作品，版权均属于仪器网，转载时须经本网同意，并请注明仪器网(www.yiqi.com)。

③本网转载并注明来源的作品，目的在于传递更多信息，并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性，不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时，必须保留本网注明的作品来源，并自负版权等法律责任。

④若本站内容侵犯到您的合法权益，请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱：hezou_yiqi

关于作者

翌圣生物科技(上海)股份有限公司

翌圣生物科技（上海）股份有限公司是一家聚焦生命科学产业链上游核心原料，从事分子、蛋白和细胞三大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业。核心产品覆盖qPCR系列、NGS系列、逆转录系列、核酸提取与纯化系列、PCR系列、分子克隆系列、体外转录系列、抗体、蛋白纯化系列、蛋白分析系列、重组蛋白、细胞分析系列、细胞培养系列、细胞转染系列、报告基因检测系列等多个品类，广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。

更多>>ta的最新资讯: 上新 | DRUG-seq，药筛最佳搭档，少量细胞转录组建库，无需核酸纯化; 直播预告 | 破解甲基化检测难题：何川团队UMBS-seq如何重塑精准医学未来？; 最美曲线 | 第七届最美曲线大赛结果出炉啦！快来看看有没有你~

关注私信

近期话题

#2025国产仪器破局之路#: 务实之选：GNR直读光谱仪在生产一线的实际体验; GNR直读光谱仪能检测那些金属材料？

##预制菜安全怎么守##: 赛多利斯集团：生物层干涉技术小分子应用文集; 预制菜安全怎么守？仪器 “黑科技”+ 标准化护三餐

#聚焦 9.3 阅兵#: 国防安全的 “隐形守护者”：盘点军事国防领域那些国产仪器; 九三阅兵装备背后：中国传感器产业的实力彰显与发展

#八一建军节——科技铸盾，仪器护航#: 如何选择到合适的磷青铜绞线？磷青铜绞线的质量...; 八一建军节铁血铸军魂

看似简单的转化也是分子克隆中关键的一环

联系我们

关注我们