小奥实验室又来了
核酸浓度JZ定量是游离核酸提取效果评估、二代测序建库等过程中重要的一环。而荧光计因其搭配的荧光试剂具有高度选择特异性,因此就较常见的分光光度法来说,能够JZ定量目标分子。
但是由于其极高的准确性,因此实验过程中对实验操作人员的加样准确性要求也比较高,但除此之外,还有一个因素也会显著影响结果的准确性,那就是:温度。
温度对荧光强度的影响
选取15℃、20℃、22℃、25℃、30℃作为孵育、检测温度(通过MSC-100 控温),每个温度点试剂均为现配现用。
实验结果显示:温度对荧光强度影响较大,孵育温度从15℃升高到30℃之后,奥盛Fluo-100两台仪器ZD荧光强度分别衰减了25.1%和27.3%,Q品牌荧光计ZD荧光强度衰减了25.4%。


参考检测数据及相关文献,建议以22-25℃作为试剂配置及孵育温度。
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