线粒体探针应用 - 罗丹明123（Rh 123）

产品概述

Rhodamine 123（Rh123）作为一种在细胞生物学研究中被广泛运用的荧光染料，具有独特的性质和重要的应用价值。它能够选择性地在活细胞的线粒体内积聚，因此常被用于对线粒体功能及细胞活力的研究。Rh123在化学性质方面表现得极为独特，属于亲脂性阳离子染料，凭借其脂溶性可轻松透过细胞膜，并借助线粒体膜电位在线粒体内积累。从光学角度来看，当激发波长为488 nm时，Rh123被激活，在530 nm处会发出强烈的绿色荧光。由于具有高量子的荧光发射效率，Rh123能够产生高对比度的荧光信号，从而成为细胞生物学实验中极为有用的工具。

产品应用

细胞活力测定：通过检测细胞内的Rh123荧光强度，可以评估细胞的活力状态。

线粒体功能检测：Rh123的荧光强度与线粒体膜电位成正比，可用于评估线粒体是否处于健康状态。

药物筛选：可用于筛选影响线粒体功能的药物，评估药物对细胞生理功能的影响。

溶液的配制 

用 DMSO 溶解，终浓度为1 - 5 mM。溶液分装，避光保存于-20ºC。

使用方法 

1、用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×10⁴～5×10⁵个/mL。

2、孵育该载玻片，用PBS或Hanks液洗涤细胞。

3、用培养基稀释Rh123母液以制备1～20 µM Rh123缓冲液。具体工作浓度取决于细胞类型和细胞浓度。

4、将Rh123缓冲液加入载玻片并在37℃下孵育30 min至1小时。

5、去除Rh123缓冲液并用培养基洗涤细胞（洗涤细胞后为了固定，加入10%福尔马林缓冲液并孵育15～20 min，接着用PBS洗涤）。

6、用带有荧光素滤光片的荧光显微镜观察细胞。

常见问题

1. 染色不足的原因

可能是染料浓度过低或孵育时间不足。可以适当增加Rh123浓度或延长孵育时间。

2. 过度染色的原因

染料浓度过高或孵育时间过长，会引起非特异性染色。可尝试降低 Rh123浓度或缩短孵育时间。

3. 线粒体荧光信号弱的处理方式

①可能是细胞状态不佳或线粒体功能受损。

②对于线粒体含量较少的细胞，可以使用较高的染料浓度和较长的孵育时间

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