「彗星检测试剂盒」价格、参数、图片

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产品详情：

彗星实验试剂盒(碱性)

产品编号：CTCC-M001

包装规格：12T/24T/48T

产品简介

当各种内外源DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，DNA的超螺旋结构受到破坏，采用化学方法使细胞膜、核膜破裂，细胞内的蛋白质、RNA以及其它成分均扩散到细胞裂解液中，而核DNA由于分子量太大只能留在原位。在碱处理和碱性电解质的作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及片段被释放出来，在电泳过程中会离开核DNA向阳极移动，形成彗星状的图像，而未损伤的DNA部分保持球形。DNA受损越严重，产生的断片越多并且片段越小，电泳时迁移的DNA量也就越大，荧光显微镜下可观察到尾部荧光强度增强。

本试剂盒具有以下特点：

采用单层凝胶体系，操作简便；
采用特色涂层多孔载玻片，增加凝胶与载玻片粘附力，有效降低脱胶风险；
凝胶经70%酒精脱水烘干后染色，有效解决镜检时不易聚焦的问题。

试剂盒组成

组分	12吨	24吨	48吨
琼脂糖彗星	8毫米	15毫米	15毫升*2
裂解液	50毫米	100毫米	100毫升*2
6孔彗星载玻片	2	4	8
10×碱性溶液	125毫米	250毫米	250毫升*2
碘化丙啶（PI）	500微升	1毫米	1毫升*2

保存：PI染色液需 4°C避光保存，其余试剂室温保存即可，有效期6个月。

注意事项

本产品仅限于科学研究使用。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
盖玻片使用前应注意是否洁净，若有明显污渍与灰尘，建议眼镜布擦拭后使用以免揭片时脱胶。
因凝胶体系较小凝胶较薄，为避免操作不当引起的脱胶，铺胶固化后从溶液中放置及拿取载玻片时需尽量动作轻柔。不可将溶液直接倾倒在玻片上，需将载玻片轻柔浸没在溶液中。

试剂制备

自备试剂：1×PBS缓冲液（不含钙镁离子）、去离子水、无水乙醇、DMSO（可选）。
拧松Comet Agarose试剂盖，90-100°C水浴使凝胶完全熔化（不建议微波加热），转移至37°C水浴锅中放置，待温度冷却平衡后方可使用（需至少平衡20min）。
Lysis Solution使用前需4°C预冷至少20min，若长期保存，室温即可，4°C长期放置会有沉淀析出。（选做）对于富含亚铁血红素的样本（如血细胞、组织样本等），Lysis Solution需额外添加10%DMSO（如45mLLysis Solution+5mL DMSO）。
解旋液配制：将10×碱性溶液用去离子水稀释后（如5mL10×碱性溶液+45mL 去离子水），室温放置备用。
电泳液配制：将10×碱性溶液用去离子水稀释后（如50mL10×碱性溶液+450mL 去离子水），4°C冷藏备用。

操作说明（示意图见尾页）

样本处理：用冷的1×PBS缓冲液（不含钙镁）重悬细胞，调整细胞密度为4×10⁵个/mL。
铺胶：按照1：10（v/v）将细胞悬液与熔化后的彗星琼脂糖（37°C）在EP管中充分混合（如10μL 细胞悬液+100μL Comet Agarose），迅速吸取20μL混合液（约800个细胞）滴加至6-well Comet Slide圆孔内，盖上盖玻片，必要时可轻微晃动载玻片或按压盖玻片以辅助凝胶充分延展至盖玻片边缘，4°C避光固化15min（高湿度环境下，凝胶不易凝结，可适当延长固化时间至30min）。
裂解：胶凝固后，用指腹小心将盖玻片推开，并将载玻片转移至装有4°C预冷的Lysis Solution的容器中，4°C裂解1h-2h，取出载玻片并沥去多余液体，蒸馏水浸洗2次，每次2min。
解旋：将载玻片转移至装有新鲜配制的解旋液的容器中，室温避光解旋20min。
电泳：水平电泳仪中倒入4°C预冷的电泳液，将载玻片轻柔浸没其中，按照1V/cm设定电压，在电流300mA条件下电泳15-30min（电流可通过改变电泳液液面高低来调节）。
中和及烘干：取出载玻片并沥去多余液体，蒸馏水浸洗2次，每次2min。转移载玻片至70%酒精溶液中，室温放置5min后取出沥干，37°C烘干15min至胶完全干燥。
染色：每孔滴加40μL染色液，室温避光染色10min，蒸馏水浸洗2次，每次2min。
观察及分析：荧光显微镜下观察，并进行图片采集。可使用彗星分析软件（如CASP，https://casplab.com/），得出彗星尾长（tail length of comet，TL）、彗星DNA比例（percent DNA in the tail，TD）、彗星尾距（tail moment，TM）等参数。DNA 损伤按慧星尾部 DNA 量占全部 DNA 量的比例可分为 5 级：0 级： < 5% 无损伤;1 级： 5 ~20% 轻度损伤;2 级： 20~40% 中度损伤;3 级： 40~95% 高度损伤;4 级： > 95% 重度损伤。