成软骨诱导培养基

一．产品简介

CTCC自主研发的成脂诱导分化培养基，体外诱导MSCs向成脂分化。该培养基包括促进MSCs向成脂分化的基础培养基，优质质量胎牛血清，所需的培养基添加物以及青链霉素。

二．包装组成成分

三．培养器皿表面的明胶包被操作流程

为了避免诱导过程中MSCs出现漂浮现象，建议对成脂诱导使用的培养器皿表面进行明胶包被。

1. 加适量1%明胶到培养器皿中，能覆盖整个培养器皿底面的量即可。
2. 摇匀液体使其覆盖整个培养器皿的底面。
3. 将铺有1%明胶的培养器皿放置在超净台至少30min。
4. 30 min后弃去明胶，待培养器皿晾干后，即可用于接种细胞。

包被明胶的培养器皿在无菌和明胶不蒸干的条件下，可以在4℃保存两周。

四．成脂诱导分化操作规程（以24孔板为例）：

1. 分离原代MSCs后，置于37℃，5%CO₂培养箱中培养，每2-3天换液或传代。
2. 建议使用低代次的MSCs（<8代，MSCs随着传代后代次的增加，多向潜能也逐渐降低）。细胞均匀分布，融合度达到80%时，用25%Trypsin-EDTA消化传代。
3. 收集细胞，按照5X10⁴cells/cm²的细胞密度接种在预先用明胶包被的孔板中，每孔培养基600μl，37℃，5%CO₂培养。
4. 待细胞融合度接近或者达到100%，开始诱导，小心弃去培养基，加入成脂诱导培养基A。成脂诱导培养基要预先37℃预热并沿壁加入。（需将原瓶培养基分装至50ml离心管后，对分装后即将使用的培养基进行预热）
5. 诱导48h吸走A液，加入37℃预热的成脂诱导分化培养基B液。
6. 再诱导24h后，吸走B液，换回A液诱导。
7. A液和B液交替作用3-5次后（12-20天），继续用B液维持培养直至细胞内的油滴足够大。

为避免成脂诱导不成功或者分化效率低，请尽量保证MSCs纯度；不要将培养板长时间置于培养箱外观察或频繁开关培养箱；诱导培养基一定要预热；尽可能地避免晃动培养板；严格按照上述规程操作。

五.干细胞成脂诱导分化实例

六.QC测试并证明诱导培养基有以下特性

1. 包含了MSCs向成脂方向分化需要的所有成分。
2. 实验比较同类产品，油红染色证明其具有ZJ诱导成脂能力。
3. 无菌检测证明无细菌、真菌和支原体
4. 证明无内毒素

七.产品使用注意事项：

1. 需避光，2-8℃保存，有效期为1个月。
2. 所有产品请于保质期内使用。
3. 产品使用前需37℃预热。