NP-40 Lysis Buffer NP-40裂解液

产品简介   

NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一种比较温和的细胞组织裂解液。含有sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(Co-IP)和ELISA等实验。

产品信息

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。

使用说明

(一) 细胞样品

1. 融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2-10分钟。

悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×10⁵-1×10⁶个细胞/管，然后再裂解。因为大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

3. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入150 μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μL 或250 μL。每100万动物细胞用100 μL本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为2-4 mg/ml，不同细胞有所不同。

（二）组织样品：

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解NP-40裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。

3. 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。

注意事项

1. 需自备PMSF(Cat#20104ES)，裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
2. 用NP-40裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（Cat#20201ES/20200ES）。 由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
3. WB实验系列产品选购可参考WB实验系列产品-选购指南。
4. 本产品仅作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20240718