Fura-2,AM,Cell Permeant 细胞膜可渗透钙离子荧光探针

产品简介

 

Fura-2，细胞生物学常用的一种钙荧光探针，能特异性地结合Ca²⁺（结合比例为1:1），同时可发出荧光，结合Ca²⁺后的最大激发波长从结合前的380 nm向340 nm（Ca²⁺饱和时）偏移，其发射荧光强度与结合Ca²⁺的浓度存在定量关系。一般用340 nm和380 nm波长激发Fura-2，通过使用与两种激发对应的荧光强度比率来计算细胞内的钙离子浓度，这种比率测量方法可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，荧光探针的渗漏，细胞厚度差异等一些误差因素。Fura-2与Indo-1已成为目前使用最广泛的比率测量的钙荧光指示剂。目前适用于Fura 2实验的设备有很多，但Fura-2特别适合于数字成像显微镜，使用该设备可更方便的调整激发波长，使探针结合钙离子后在300 - 400 nm的激发波长范围内扫描Fura-2的吸收偏移，在510 nm处检测发射波长。

由于Fura-2是极性大的酸性化合物，无法进入细胞内，为此在其负性基团上结合乙酰氧甲酯，使其成为Fura-2/AM，该变化既增加了酯溶性又消除了负电荷，极大的提高了细胞渗透性。在细胞内，Fura-2/AM被酯酶水解成Fura-2后可与胞浆游离Ca²⁺可逆性结合。

 

组分信息

 

组分名称	40702ES50	40702ES72	40702ES80
Fura-2, AM, Cell Permeant 细胞膜可渗透钙离子荧光探针	50 μg	5×50 μg	1 mg

 

产品性质

 

CAS号（CAS NO.）	108964-32-5
分子式（Formula）	C44H47N3O24
分子量（Molecular Weight）	1001.86
Ex/Em	Ex=340 nm/380 nm  Em=510 nm
溶解性（Solubility）	溶于DMSO
外观（Appearance）	黄色或橙黄色粉末
结构式（Structure）

 

储存条件

 

室温运输。-20℃避光干燥保存，可保存1年。

 

使用说明

 

1. Fura-2/AM储存液的配制

利用高质量无水DMSO溶解Fura-2/AM配制成2 - 5 mM的储存液，该储存液可分装于-20℃避光干燥密封保存，最长可保存6个月，但是避免反复冻融，建议分装保存。每次使用前需回温至室温。

2. Fura-2/AM工作液的配制

利用合适缓冲液（如HHBS）将Fura-2/AM稀释成2 - 20 μM的工作液，并添加0.04% Pluronic F-127和有机阴离子转运抑制剂probenecid（0.5 - 1 mM）。

注：① 对于大多数细胞系，建议最终浓度为4 - 5 μM的Fura-2/AM。细胞加载所需的指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

② Fura-2/AM工作液需现配现用，避免反复冻存。

③ Pluronic F-127 可以防止 Fura-2/AM在缓冲液中聚合并能帮助其进入细胞。

3. 取出预培养的细胞，除去培养基，使用缓冲液洗涤细胞3次。

注：如果使用含血清的培养基，血清中的酯酶会降低Fura-2/AM进入细胞的效果。另外含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。

4. 将 Fura-2/AM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。在37℃培养30 - 60 min。
5. 用缓冲液（如HHBS）洗涤细胞 3 次，以充分去除残留的Fura-2/AM工作液。然后加入缓冲液覆盖细胞。
6. 数字成像显微镜检测细胞。

注：某些细胞具有自体荧光会影响结果分析，需使用未加载探针细胞做对照，在结果分析时在同一波长下扣除自荧光。

 

注意事项

 

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

4. 乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethyl ester，AM）容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底

5. 第一次使用时，建议母液现配现用。且溶解后的试剂尽可能在短时间内使用，以保证实验效果。

6. 母液遇水极易分解，若单次不能用完，建议分装保存，例如5μL/管，用封口膜封口，并严格做到≤-20℃密封干燥保存。

7. 建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。

 

Ver.CN20241124