MTT细胞活力、毒性检测试剂盒

产品名称	MTT细胞活力、毒性检测试剂盒
货号	SNK-005
规格	500 次
简介	MTT全称为3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，中文名噻唑蓝。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源底物MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。再利用二甲基亚砜(DMSO)等溶解剂溶解细胞中的甲臜沉积物，用酶标仪于490 nm或570 nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，甲臜形成的量与活细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，活细胞数越多，细胞活性越强(如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小)。 该检测方法灵敏度高、经济实用，已广泛用于细胞因子活性检测、细胞毒性检测等诸多实验过程。
使用方法	1.提前将细胞按实验需要接种到96孔培养板里（细胞增殖活力实验建议2000个/孔/100μL，细胞毒性实验建议5000个/孔/100μL，具体接种数量可以视实验需要及细胞增殖速度调整），待细胞贴壁后，按照实验设计进行加药、细胞因子刺激、转染等细胞处理； 2.细胞处理完成后，每孔加入10μL MTT工作液，在细胞培养箱内孵育4 h；如果担心药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和MTT工作液，但没有细胞的孔作为空白对照； 3.完成孵育后孔板底部会出现少量紫色结晶，用移液枪小心吸除孔板内上清溶液，注意避免吸到紫色结晶以免影响后续检测； 4.向孔板中加入100μL溶解液，37℃孵育15 min左右，期间可用手指轻微敲击板底小幅度震荡，待紫色结晶全部溶解（紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些；如果紫色结晶较大较多，可适当延长溶解时间）； 5.在波长570nm或560-600 nm处测定OD值，根据OD值判断活细胞数量以确定处理过程对细胞活性的影响； 6.结果计算：
产品组分
存储条件	2-8℃或-20℃，避光保存
保质期	2-8℃（3个月）或-20℃（一年）（避光，避免反复冻融）

注意事项：
1.溶剂在温度较低时可能结晶，使用前注意复温融化。
2.MTT工作液呈淡黄色溶液，若发现颜色变黑或者灰绿色请勿使用。
3.试剂盒反复冻融会降低检测效果，虽然该试剂在反复冻融3次后对检测效果无明显影响，但可在第一次解冻后分装成小规格。反复冻融过程中可能出现少量沉淀，应将其平衡至室温，并尽可能溶解。
4.多数情况下，在细胞中加入MTT工作液孵育4小时可获得理想结果，但孵育时间因细胞类型、细胞密度等实验条件的不同而不同。
5.信号强度和稳定性会受到温度的影响，反应前将MTT工作液平衡至室温。
6.由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
7.本产品基于琥珀酸脱氢酶还原反应，样品中应尽量不含较多还原剂及抗氧化剂（还原型谷胱甘肽、巯基乙醇、维生素C等）。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
8.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
9.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。