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无处不在的PCR污染,如何有效避免?

艾普拜生物科技(苏州)有限公司 2023-01-03 16:11:31 141  浏览
  • 前言

    在PCR检测过程中,不可否认的是,没有任何检测是100%准确的,比如我们可能也曾听过假阳性这个名词,那为什么会出现假阳性呢?这其实跟实验操作过程造成的污染相关,在实验开展过程中,主要有4种污染途径:标本间交叉污染、PCR试剂污染、PCR扩增产物污染、实验室克隆质粒污染。

    如何对污染进行监测?

    1. 阳性对照

    在建立PCR实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照,它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否符合理论要求的一个重要的参考标志,阳性对照要选择扩增度中等、复性好,经各种鉴定是该产物的标本,如以重组质粒为阳性对照,其含量宜低不宜高(100个拷贝以下),但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本,其对检测或扩增样品污染的可能性很大,因而当某一PCR试剂经自己使用稳定,检验人员心中有数时,在以后的实验中可免设阳性对照。

    2. 阴性对照

    每次PCR试验务必做阴性对照,它包括:①标本对照,被检标本是血清就用鉴定后的正常血清做对照,被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞做对照;②试剂对照,在PCR试剂中不加模板DNA或RNA,进行PCR扩增,以检测试剂是否污染。

    3. 重复性实验

    4. 选择不同区域的引物进行PCR扩增

    如何避免PCR污染?

    实验室防污染是重中之重,毕竟影响最终检测结果,那么我们有哪些防污染的方法呢?



    除了注意避免人工操作引入的污染,我们在实验时应设立适当的阳性对照和阴性对照,阳性对照以能出现扩增带的标准病原体核酸为宜,并注意交叉污染的可能性,每次反应都应由一管不加模板的试剂对照及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照。同时减少PCR循环次数,PCR产物达到检测水平就适可而止。


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无处不在的PCR污染,如何有效避免?

前言

在PCR检测过程中,不可否认的是,没有任何检测是100%准确的,比如我们可能也曾听过假阳性这个名词,那为什么会出现假阳性呢?这其实跟实验操作过程造成的污染相关,在实验开展过程中,主要有4种污染途径:标本间交叉污染、PCR试剂污染、PCR扩增产物污染、实验室克隆质粒污染。

如何对污染进行监测?

1. 阳性对照

在建立PCR实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照,它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否符合理论要求的一个重要的参考标志,阳性对照要选择扩增度中等、复性好,经各种鉴定是该产物的标本,如以重组质粒为阳性对照,其含量宜低不宜高(100个拷贝以下),但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本,其对检测或扩增样品污染的可能性很大,因而当某一PCR试剂经自己使用稳定,检验人员心中有数时,在以后的实验中可免设阳性对照。

2. 阴性对照

每次PCR试验务必做阴性对照,它包括:①标本对照,被检标本是血清就用鉴定后的正常血清做对照,被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞做对照;②试剂对照,在PCR试剂中不加模板DNA或RNA,进行PCR扩增,以检测试剂是否污染。

3. 重复性实验

4. 选择不同区域的引物进行PCR扩增

如何避免PCR污染?

实验室防污染是重中之重,毕竟影响最终检测结果,那么我们有哪些防污染的方法呢?



除了注意避免人工操作引入的污染,我们在实验时应设立适当的阳性对照和阴性对照,阳性对照以能出现扩增带的标准病原体核酸为宜,并注意交叉污染的可能性,每次反应都应由一管不加模板的试剂对照及相应不含有被扩增核酸的样品作阴性对照。同时减少PCR循环次数,PCR产物达到检测水平就适可而止。


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  全自动研磨仪的研磨应用,虽可对任何来源的样品进行研磨分析,但在对一些特殊的样品研磨是可损坏研磨设备的应用,增加其维修频率,减少研磨设备的使用周期。

  
  全自动组织研磨仪在对硬脆性材料进行研磨粉碎时的操作应用。例如在对陶瓷样品研磨时,研磨设备很快便会出现磨损,增加维修频率,且其加工表面的质量及细度会严重下降,不仅会影响导对其的研磨加工效率,还会增加实验粉碎的加工成本,从而导致研磨的合格率降低,进而在研磨过程中易产生的各种问题,进而减少研磨设备的使用周期。
  
  样品研磨均匀性的重要性。样品研磨磨损的不均是可使多个试样的平整度发生变化,多个试样的研磨不均,会造成研磨压力不均,同时使得工件平面度不能达到加工要求,同时也会对研磨设备造成损耗。但,样品的均匀性好,可确保长期加工的工件在批量加工中具有良好的表面细度,从而降低全自动研磨仪的修复频率,提高样品研磨效率和合格率,降低实验应用成本。
  
  全自动组织研磨仪可用于多种行业领域,其中包括分子生物学、法医、考古学鉴定、农业育种、牙科体检等行业领域的应用,特别是随着生命科学领域的研究日益深入,实验操作往往是需要从分子生物学角度对其开展分析,而这也就进而导致了对样品预处理的需求越来越高,而该研磨设备不但可满足对样品实验的所需要求,还可高效快速的助力实验的完成。
  
  因此在助力样品研磨的过程中,避免产生对研磨设备的损耗是很重要的,减少损耗的出现,可减少队研磨设备的维修频率,进而可更好的应用研磨设备,但在应用期间,对其研磨设备的清洗维护也不可或缺,残留的研磨液也会侵蚀研磨设备,对其造成损坏。

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