GX液相色谱仪测定茶叶中黄曲霉毒素B1

1.适用范围 本方法适用于出口茶叶中黄曲霉毒素B1含量的检验 2.原理概要 样品用提取，提取液经硅胶柱净化，净化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有荧光检测器的GX液相色谱仪测定，外标法定量 3.主要试剂和仪器 3.1.主要试剂 ； 正己烷； 苯； 甲醇：紫外光谱级； 乙腈：紫外光谱级； 三氟乙酸； 乙腈-水溶液（1＋1）； -甲醇溶液（95＋5）； 苯-乙腈溶液（98＋2）； 黄曲霉毒素B1标准品：纯度99%； 黄曲霉毒素B1标准溶液：准确称取适量的黄曲霉毒素B1标准品，以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中，配成浓度为10g/mL标准贮备液根据需要，再配成适当浓度的标准工作溶液 3.2.仪器 GX液相色谱仪，配有荧光检测器； 天津恒奥硅胶小柱； 天津恒奥振荡器：HMS系列； 天津恒奥超声波：HUHS系列； 天津恒奥氮吹仪； 天津恒奥滤膜：有机系用，0.45m； 天津恒奥微孔滤膜过滤器 旋转蒸发器； 微量注射器； 离心管：5mL具塞磨口； 粉碎机 4.试样的抽取与制备 4.1.抽样方法 从整批产品堆垛的上下不同部位随机抽取2.2规定的件数，逐件开启分别倒出全部茶叶于塑料布上，用取样铲从每件中各取出有代表性的样品约500g将所取样品充分混匀，用四分法或分样器逐步缩分出500g，装入洁净密封的样品筒内，加封后，标明标记，及时送实验室 4.2.试样制备 将所取回样品全部磨碎，通过20目筛，混匀，均分成两份试样，装入洁净容器内，密封，标明标记 4.3.试样保存 将试样于室温下保存 注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 5.过程简述 5.1.提取 称取试样5.0g（极ng确到0.1g）置于100mL具塞锥形烧瓶中，加入15mL，于振荡器上提取30min，然后经垫有玻璃纤维的漏斗过滤收集滤液于旋转蒸发器的具尾管圆底烧瓶内，并用洗涤滤渣，收集滤液至约20mL 5.2.净化 用旋转蒸发器将上述滤液在50水浴中浓缩至约1mL，经0.45m滤膜过滤后，注入硅胶小柱中用2～4mL正己烷洗涤烧瓶后淋洗小柱，弃去流出液然后用3～4mL-甲醇溶液以每秒钟2滴的流速洗脱，收集洗脱液于离心管中用氮气仪缓缓吹干，供衍生用 5.3.衍生 5.3.1.试样 加200L正己烷和50L三氟乙酸于上述离心管中，盖紧磨口塞，超声振荡1min，静置10min，用氮吹仪缓缓至干用乙腈-水溶液（1＋1）定容至1.0mL，超声1min，用0.5m滤膜过滤，滤液供液相色谱用 5.3.2.标准工作溶液 取1.0mL标准工作溶液，用氮吹仪缓缓吹干，按5.3.1步骤操作 5.4.测定 5.4.1.色谱条件 色谱柱：NOVA PAKc18，300mm×3.9mm（内径）； 流动相：甲醇-水溶液（42＋58）； 流速：0.8mL/min； 荧光检测器：激发波长375 nm，发射波长425 nm； 色谱柱温度：室温 5.4.2.测定 根据样液中黄曲霉毒素B1的含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液标准工作溶液和样液中黄曲霉毒素B1衍生物的响应值均应在仪器检测线性范围内对标准工作溶液和样液的衍生物溶液等体积参插进样测定在上述色谱条件下，黄曲霉毒素B1衍生物保留时间约为8min 5.4.3.空白试验 除不加试样外，按上述测定步骤进行 6.结果计算 用色谱数据处理机进行数据处理 7.低限和回收率测定 7.1.低限 本方法的测定低限为0.001mg/kg 7.2.回收率 回收率的实验数据：黄曲霉毒素B1的添加浓度在0.001～0.5mg/kg范围内，回收率为89.1%～104.9% 由上表可以看出：使用天津恒奥设备处理样品，可以得到预期的结果