- 2025-01-21 09:30:33固相萃取法
- 固相萃取法是一种样品预处理技术,基于目标化合物与固相萃取材料间的选择性吸附与解吸原理。它广泛应用于环境、食品、药物等领域的样品净化与富集,能有效去除干扰物,提高检测灵敏度。固相萃取法操作简便、耗时短、回收率高,且可自动化操作,是现代样品前处理的重要方法之一。
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固相萃取法问答
- 2022-03-02 13:15:01Copure® MCX | 食品中4-甲基咪唑的固相萃取法
- 4-甲基咪唑(4-MI)是一种有致癌风险的污染物,常作为生产焦糖色素的副产物出现在食品中。本方案参照国标GB 5009.282-2020,采用Copure®MCX小柱,以百香果汁及蜂蜜为基质样品,建立了不同基质中4-甲基咪唑的液相色谱-串联质谱测定法,低、中、高三水平的加标都能获得满意结果。样品提取准确称取均匀的样品2.0 g(精确至0.001 g)于50 mL离心管中,加入2 %甲酸水溶液至20 mL,混匀,10000 r/min离心5 min,上清液待净化。样品净化活化:依次用5 mL甲醇,5 mL水活化固相萃取小柱。上样:取待净化样品10 mL过柱,弃掉流出的液体。淋洗和洗脱:分别加入2 mL 2 %甲酸水、5 mL水、5 mL甲醇淋洗固相萃取小柱,弃去流出的液体;加入8 mL 5 %氨水甲醇洗脱固相萃取小柱,收集洗脱液。重新溶解:45 ℃下氮吹至近干,加入乙腈-5 mmol/L乙酸铵(9+1)溶液1 mL复溶,涡旋30s,过0.22μm有机系滤膜,上机测试。本方案所使用仪器:BN24智能水浴氮吹仪 取适量标液,用乙腈-5 mmol/L乙酸铵(9+1)溶液稀释成浓度分别为10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、400 μg/L的标准上机溶液。仪器条件1)色谱条件仪器:UPLC-MS/MS(Thermo Fisher TSQ Endura)色谱柱:GOWON HILIC(2.1 mm×100 mm,2.7 μm)流动相:A:5 mmol/L乙酸铵 B:乙腈洗脱方式:梯度洗脱,见表1流速:0.6 mL/min柱温:35℃进样量:5 μL表1 梯度洗脱程序2)质谱条件离子源:HESI电喷雾电压:3500 V鞘气压力:35 arb辅气压力:5 arb 离子传输管:380 ℃辅气温度:350 ℃表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表(*为定量离子)实验结果表3 4-甲基咪唑加标回收实验结果图1 百香果汁中添加水平为100.0 μg/kg时4-甲基咪唑的离子流图图2 蜂蜜中添加水平为100.0 μg/kg时4-甲基咪唑的离子流图订购信息
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- 2021-12-13 14:58:34猪肉中喹诺酮类药物的测定(C18固相萃取法)
- 本方案建立了以C18固相萃取柱对猪肉样品中4种喹诺酮类药物萃取净化方法,进行低中高三水平基质加标,都能获得满意的实验结果,回收率介于84%~115%之间,RSD值小于10 %。实验过程样品提取准确称取粉碎均匀的猪肉样品2.0 g于干净离心管中,加入10 mL 5%甲酸乙腈溶液,再加入1 g NaCl,2500 r/min涡旋提取10 min,8000 r/min离心2 min,取上清液5 mL氮吹近干,用5 mL 5 %甲酸水溶液复溶,待净化。样品净化活化:5 mL甲醇,5 mL水上样:上述待净化液淋洗:5 mL 10 %甲醇水洗脱:5 mL 10 %氨水甲醇收集洗脱液,氮吹近干,初始流动相复溶,上机。基质标准曲线溶液的制备选同类型空白猪肉样品,按上述前处理方法进行操作,取适量的标液配制成合适浓度的基质曲线。仪器条件色谱条件仪器:UPLC-MS/MS(Thermo Fisher TSQ Endura)色谱柱:菲罗门 Titank C18 (2.1 mm×50 mm,3 μm)流动相:A:水(0.1 %甲酸) B:甲醇(0.1 %甲酸)洗脱方式:梯度洗脱,见表1流速:0.3 mL/min柱温:30℃进样量:5 μL质谱条件离子源:HESI电喷雾电压:3500 V鞘气压力:40 arb辅气压力:2 arb 离子传输管:380 ℃辅气温度:350 ℃实验结果表3 4种喹诺酮类加标回收实验结果订购信息
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- 2022-11-08 10:46:28机器人走进实验室系列(三)固相萃取篇:Extraction+互联设备实现全自动固相萃取工作流
- 样品制备 — 从基质中分离出目标分析物,并尽可能去除干扰,是生物分析工作流程的关键组成部分。为了获得准确、精密、可重现的实验结果,往往需要熟练且有经验的分析人员,因为任何错误或不一致都可能导致定量不准确或重做。这些错误或不一致包括在生成校准曲线和QC样品时的移液错误、遗漏或错误标记的样品、不正确的试剂添加等情况。将自动化引入生物分析实验室不仅有助于最小化或消除这些挑战,还可以解放分析人员的双手,使其能够从事其他更高价值的工作。下面小编就向大家介绍如何使用Andrew+移液机器人制备校准曲线,对QC样品(血浆中的多种小分子药物)进行稀释。目标分析物包括乙酰唑胺、扑热息痛、泼尼松、2-甲基苯甲酰胺、可的松、美托洛尔和阿米替林。然后,使用Andrew+搭配Extraction+模块,对样品进行全自动SPE。制备好的样品使用LC-MS进行定量分析,获得校准曲线结果以及重现性和回收率指标。图1. Andrew+搭配Extraction+ SPE新模块,执行自动化SPE样品制备和LC-MS分析工作流,分别使用Oasis HLB SPE小柱和SPE萃取板。 优势使用Andrew+ Robot搭配Extraction+固相萃取新模块,可实现标准曲线制备、QC样品稀释和无人值守的全自动SPE工作流;OneLab软件拥有简洁直观的用户界面,便于用户轻松设计和执行各种自动化样品制备方案,轻松实现方法创建和方法转移;1cc、3cc和6cc固相萃取小柱或96孔萃取板均可在Extraction+互联设备上实现固相萃取;受OneLab软件控制的可编程的真空泵压力曲线可提高SPE方法的重现性。实验方案一制备校准曲线,样品稀释,使用Oasis HLB 1cc SPE小柱执行固相萃取 样品进行反相固相萃取工作流:*注意:沃特世于1996年推出Oasis HLB, 是所有Oasis吸附剂的主要成分。可耐受pH 0-14,采用独特的水可浸润性聚合物吸附剂,省去了活化和平衡步骤,是SPE的新标杆。以Andrew+移液机器人进行全自动SPE为例,介绍OneLab软件中的自动化方法,Andrew+将上图所示的SPE步骤自动化。图2. 左侧为OneLab的方法创建界面,右侧为SPE工作流使用的移液枪、枪头、Dominos和Device物料清单。Andrew+移液机器人搭载Extraction+ SPE新模块的仪器配置如下图,包括:Andrew+ Robot主机;微孔板抓手(自动移动96孔板);Extraction+配套的真空泵(压力曲线受软件控制);废液瓶(上样和清洗产生的废液,经真空泵抽取,进入废液瓶);Extraction+配套的萃取套件(上部放置SPE小柱或萃取板,下部放置收集容器);放置SPE小柱或萃取板的位置(左侧升降Lifter可将承载SPE小柱的架子移到左侧,以便用微孔板抓手将收集容器放入下部)。实验结果使用 沃特世ACQUITY UPLC I-Class液相系统搭载快速柱进行色谱分离,再用 Xevo TQ-XS串联四极杆质谱仪对从血浆中萃取出的小分子药物进行检测。分析3个浓度的血浆样品(Low QC-10 ng/mL, Mid QC-50 ng/mL, High QC-150 ng/mL),回收率范围是95.8% - 108.4%,精密度结果是几乎所有RSD%值≤5%。这些结果满足FDA对小分子生物分析方法验证的推荐限值。表1. 回收率和重现性结果 — Andrew+执行血浆样品制备,Extraction+搭载Oasis HLB 1cc SPE小柱执行全自动SPE。实验方案二制备校准曲线,样品稀释,使用Oasis HLB 30mg 萃取板执行固相萃取 与实验方案一执行同样的反相固相萃取工作流,萃取耗材是Oasis HLB 30 mg plates。 实验结果使用沃特世ACQUITY UPLC I-Class超高效液相色谱系统搭载快速柱进行色谱分离,再用Xevo TQ-XS串联四极杆质谱仪对从血浆中萃取出的小分子药物进行检测。分析3个浓度的血浆样品(Low QC-20 ng/mL, Mid QC-50 ng/mL, High QC-400 ng/mL),回收率范围是88.6% - 110.8%,精密度结果是大多数RSD%值≤5%。这些结果满足FDA对小分子生物分析方法验证的推荐限值。表2. 准确度和精密度结果 — Andrew+执行血浆样品制备,Extraction+搭载Oasis HLB 30 mg plates执行全自动SPE。
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- 2024-01-17 16:05:50免疫层析法和胶体金法的区别
- 免疫层析法和胶体金法是两种常用的生物检测技术,它们在原理、应用和优缺点等方面存在显著差异。 ①原理区别:免疫层析法是一种基于抗原-抗体反应的生物检测技术,利用标记有荧光物质、酶、胶体金等物质的抗体或抗原,检测样品中是否存在相应的抗原或抗体。当样品中的抗原与标记的抗体结合后,可以通过层析作用将结合物分离并检测。而胶体金法则是利用胶体金作为标记物,通过免疫学方法检测样品中的生物分子。胶体金是一种由氯金酸水溶液在还原剂作用下形成的金颗粒,这些金颗粒分散在溶液中形成胶体溶液。当生物分子与胶体金结合后,可以通过显色反应判断是否存在该生物分子。 ②应用区别:免疫层析法主要应用于医学诊断、食品安全、环境监测等领域。例如,用于检测尿液、血液、组织液等生物样品中的病毒、细菌、蛋白质等物质。胶体金法则主要应用于免疫分析、生物传感器等领域。由于胶体金法操作简便、灵敏度高、特异性好等特点,被广泛应用于临床诊断、生物制品质量控制等方面。 ③优缺点区别:免疫层析法和胶体金法在优缺点方面也存在差异。免疫层析法的优点在于其高特异性、高灵敏度、高重复性等特点,能够快速准确地检测出样品中的目标物质。但是免疫层析法的操作较为繁琐,需要经过多个步骤才能完成检测,而且成本较高。胶体金法的优点在于其操作简便、快速、无需特殊设备等特点,能够在短时间内完成大量样品的检测。但是胶体金法的缺点在于其灵敏度相对较低,对于低浓度目标物质的检测可能会出现假阳性或假阴性的情况。 总的来说,免疫层析法和胶体金法各有其优缺点,具体应用应根据实际情况选择。在某些情况下,可以将两种方法结合使用,以获得更好的检测效果。例如,在检测病毒抗原时,可以先使用免疫层析法进行初筛,然后再用胶体金法进行确认,以提高检测的准确性和特异性。 总之,免疫层析法和胶体金法是两种常用的生物检测技术,它们在原理、应用和优缺点等方面存在显著差异。在实际应用中,应根据具体情况选择合适的方法,以达到最-佳的检测效果。同时,随着技术的不断发展,相信这两种方法将会在未来的生物检测领域发挥更加重要的作用。蛋白层析纯化详情:https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索“义翘神州”与我们取得联系。
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- 2023-02-01 09:19:52阿斯曼尔QuickTrace M96固相萃取装置
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