
- 2025-01-21 09:33:29荧光标记肽、
- 荧光标记肽是一种经过特殊处理的肽类分子,其中融入了荧光基团。这种荧光基团能够在特定波长光的激发下发出荧光,从而实现对肽分子的追踪和可视化。荧光标记肽在生物学和医学研究、药物研发及蛋白质相互作用等领域有着广泛应用。它们可以帮助研究人员观察肽在细胞内的定位、动态变化及与其他分子的相互作用,是研究生物过程和疾病机制的重要工具。通过荧光标记,可以更加直观、精确地解析肽的功能和作用机制。
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荧光标记肽、问答
- 2022-07-22 15:27:25荧光定量PCR实验,荧光标记怎么选?
- 荧光定量PCR技术是将常规的PCR和荧光检测技术相结合,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,以此实现对初始模板的定量分析。荧光定量PCR技术作为当今生物学研究的重要手段之一,在基础科学、生物技术、医学研究、法医学、诊断学等多方面具有广泛的应用前景。说到荧光定量PCR技术,我们经常会问类似于“你的实验是染料法还是探针法”,“你用的探针是什么类型”等之类的问题,这其实是对荧光标记的选择。根据荧光标记的不同,可以将荧光定量PCR实验分为探针法和染料法两大类。染料法染料法利用能与DNA双链结合的染料来实现,如SYBR Green I。该染料在游离状态下呈现微弱的荧光,一旦与双链DNA的双螺旋小沟结合,其绿色荧光增强约1000倍。因此其总的荧光强度与双链DNA含量成正比,利用这一关系可以反映生成的PCR产物的量(图 1)。SYBR Green I的吸收约在497 nm,发射波长约在520 nm,与FAM荧光分子的光谱性质类似,因此在所有的荧光定量PCR设备中都是通道检测,即“FAM/SYBR Green I”通道。▲ 图1 染料法原理图理论上,所有能与双链DNA结合的染料都可以用于qPCR检测,如溴化乙锭EtBr,碘化丙啶PI,吖啶橙、Cy3等。而选择用于qPCR反应的染料通常会从信号强度、生物安全性、检测简便性和经济适用性这几个因素考虑。例如EtBr可能存在潜在的致癌性。综合考虑下来,SYBR Green I成了比较理想的选择。目前,使用Evagreen的实验者也越来越多,Evagreen作为一种新型的染料,其光谱性质与SYBR Green I类似,其优势在于:▶ 对PCR反应的抑制程度小。高浓度SYBR Green I会强烈抑制PCR反应,因此要控制其使用浓度,一定程度上降低了DNA检测的灵敏度。▶ 与DNA结合密度高。单位长度的DNA双链上Evagreen的密度更高,为饱和型染料,消除了SYBR Green I存在的“染料重分布”的缺陷,提高检测灵敏度的同时也可用于高分辨率溶解曲线HRM。▶ 化学性质更稳定,适合长期保存。TaqMan 探针TaqMan 探针基本可以满足60%以上的qPCR实验,如常规的基因表达和拷贝数变异CNV实验。TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针,荧光基团连接在探针的5'末端,而淬灭剂则在3'末端(图2)。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收; PCR扩增时, Tag酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。常用的荧光基团是FAM,TET,VIC,HEX。▲ 图2 Taqman探针MGB探针对于要分辨单碱基差异的SNP实验,采用对碱基错配容忍度更低的MGB探针,在淬灭基团后加入了DPI3基团(图3),从而提高了与靶标结合的亲和力;而且可以对靶点碱基进行化学修饰,如PeptideNucleic Acid和Locked Nucleic Acid。▲ 图3 MGB探针双杂交探针Taqman探针对探针的长度有比较严格的要求,双杂交探针则消除了这一“缺陷”。双杂交探针是由两条寡核苷酸单链组成,一条的3’端带有供体荧光分子,另一条的5’端带有受体荧光分子(图4)。游离状态下荧光供体会发出荧光,但当两条单链都匹配到模板链上时,就会发生荧光共振能量转移FRET,受体荧光分子就可以发出荧光,其荧光强度与生成的产物的量成正比。双杂交探针的优势有两点:摆脱了探针长度的限制,较长的探针可以提高与模板匹配的成功率;只有上下游两条探针都正确匹配后才能检测到受体荧光分子发出的荧光,特异性有所提高。▲ 图4 双杂交探针分子信标探针游离状态下,分子信标探针是一种茎环结构,其环状部分的15-30个碱基可以与靶标区域相结合匹配,下端的配对区域(左右一般各5-6个碱基)则由重复的GC组成,从而将5’的荧光分子和3’的淬灭基团紧紧聚在一起,荧光发生淬灭;当退火时,分子信标探针解开环并与模板靶标杂交,这样荧光分子和淬灭基团的物理距离就变大了,荧光淬灭的前提就打破了(图5)。除了MGB探针,分子信标探针也非常适合用于SNP检测。▲ 图5 分子信标探针除了上述几种类型的探针之外,还有尝试将引物和探针功能相结合的技术,如Amplifluor、LUX等,在设计难度上有所提高,但使用时更简便。各有其应用的侧重点和设计上的利弊,在此不多赘述。那么在荧光定量PCR实验中,我们应该如何进行选择呢?在这里,给大家总结了一些两种方法的区别,供大家参考。表1 染料法和探针法的区别
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- 2023-05-08 19:13:14明美LED荧光光源助力显微镜荧光升级
- 明美LED荧光光源助力显微镜荧光升级荧光显微镜具有特异性强、检出率高等优势,因此在各种科研和医学检查应用中使用广泛,传统荧光显微镜因为汞灯光源限制,有比较多使用难点,明美针对这些问题,投入大量人力和资金,研发出了一系列LED荧光光源,助力显微镜荧光升级和传统荧光显微镜升级LED荧光显微镜,取得市场广泛认可。荧光显微镜的常用光源通常都是白光光源,而荧光光源有高压汞灯,氙灯,金属卤素灯和LED白光光源以及LED单波长光源,光源间各有优劣势,近期,北京用户需要替换汞灯光源,因为汞灯寿命短,需预热,操作繁琐,明美北京区域工程师提供了四通道的LED荧光光源MG-120,寿命长,即开即关,操作简单,解决的老师的使用烦恼 荧光光源MG-120采用四通道独立控制,可选BGUR等不同通道配置,寿命长,衰减慢,通常不需要更换灯泡及校准,可以即开即用;控制方便,外部配备有控制器,能进行特定波长开关和亮度记忆,减少荧光串色及荧光淬灭。此次,用户是搭配奥林巴斯倒置显微镜IX73,该荧光光源已做测试,可适配各荧光显微镜如果您对荧光光源感兴趣或存在疑问,欢迎与我们联系,我们将竭诚为您服务!来源:https://www.mshot.com/article/1738.html
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- 2023-06-12 14:09:33荧光生物显微镜应用于CTC检测
- 级荧光生物显微镜MF43-M应用于CTC检测CTC检测不仅特异性强、灵敏度高,能更早预知判断,还能重复取样,快速便捷,随时监测,在临床诊断应用广泛。近期,明美湖南区域安装科研级荧光生物显微镜MF43-M,以用于CTC检测及FISH检测,整体效果获得用户认可。CTC检测作为一种新型的非侵入性诊断手段,在一定程度上弥补了传统方法的不足,有 “液体活检”之称,好的方法当然少不了好的工具,明美科研级荧光生物显微镜MF43-M配备6孔落射荧光模块和超长寿命LED荧光光源,可扩展升级实现各种观察方式,如明场、暗场、荧光等,高数值孔径半复消色差物镜成像清晰,尤其适合CTC检测等应用。科研级荧光生物显微镜MF43-M已取得医疗器械注册证,严格的质量把关及符合人体工程学的配件能帮您克服长期使用姿势不舒服而导致肌肉劳损。可配套同样拥有注册资质的荧光原位杂交MFISH软件,实现高质量的FISH成像。您若对荧光生物显微镜感兴趣或存在疑问,欢迎与我们联系,我们将竭诚为您服务!免责声明本站无法鉴别所上传图片、字体或文字内容的版权,如无意中侵犯了哪个权利人的知识产权,请来信或来电告之,本站将立即予以删除,谢谢。 来源:https://www.mshot.com/article/1761.html
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- 2023-05-26 10:20:02FluorCam-Pro植物多光谱荧光成像系统
- FluorCam-Pro植物多光谱荧光成像系统是FluorCam叶绿素荧光成像技术的最 新高级扩展产品。此系统既可用于PAM脉冲调制式叶绿素荧光动态成像分析,又可用于UV紫外光对植物叶片激发产生的多光谱荧光成像测量分析,还可选配滤波器组对GFP、RFP、YFP、SYBR Green等荧光蛋白和荧光染料进行稳态荧光成像测量。测量对象包括叶片、果实、花朵、整株拟南芥或其他小型植株、苔藓、微藻、大型藻类乃至特定的动物样品。应用领域:植物光合生理生态植物逆境胁迫生理与易感性植物初级代谢与次级代谢植物表型组学成像分析(Phenotyping)作物遗传育种与抗性筛选种子萌发与活力监测转基因植株筛选功能特点:多激发光-多光谱荧光成像技术:通过两种以上不同波长的光源激发植物样品中不同的发色团发出荧光并进行成像检测,即为多激发光多光谱荧光成像技术。植物的多光谱荧光主要包括叶绿素荧光、UV紫外光激发多光谱荧光和荧光蛋白荧光FluorCam-Pro无需更换任何配件即可同步实现多激发光-多光谱荧光成像功能:PAM脉冲调制式叶绿素荧光成像紫外激发F440、F520、F690、F740多光谱荧光成像GFP、RFP、YFP等常用荧光蛋白成像可根据用户需要定制荧光蛋白或荧光染料成像,如BFP、CFP、SYBR Green、DAPI等可对黄酮、花青素含量进行定量测量可进行自动重复成像测量和无人值守监测,可设置实验程序(Protocols)自动循环成像测量,成像测量数据自动按时间日期存入计算机(带时间戳)测量样品为各种活体植物样品,包括叶片、花卉、果实、整株拟南芥或其他小型植物、微藻(包括液滴、多孔板、固体培养基)及大型藻类等技术指标:一体式设计,自带暗适应箱体最 佳成像面积:20×20cm测量参数:Fo, Fo’, Fs, Fm, Fm’, Fp, FtDn, FtLn, Fv, Fv'/ Fm', Fv/ Fm ,Fv',Ft,ΦPSII, NPQ_Dn, NPQ_Ln, Qp_Dn, Qp_Ln, qN, qL, QY, QY_Ln, Rfd, ETR等50多个叶绿素荧光参数;紫外激发多光谱荧光成像参数:F440、F520、F690、F740;荧光蛋白荧光强度参数Ft;每项参数均可显示对应二维荧光彩色图像。并可测量计算黄酮醇指数Flavonol Index,、花青素指数Anthocyanin Index。具备完备的自动测量程序(protocol),可自由对自动测量程序进行编辑1)Fv/Fm:测量参数包括Fo,Fm,Fv,QY等叶绿素荧光参数2)Kautsky诱导效应:Fo,Fp,Fv,Ft_Lss,QY,Rfd等叶绿素荧光参数3)Quenching荧光淬灭分析:Fo,Fm,Fp,Fs,Fv,QY,ΦII,NPQ,Qp,Rfd,qL等50多个叶绿素荧光参数4)Light Curve光响应曲线:不同光强梯度条件下Fo,Fm,QY,QY_Ln,ETR等叶绿素荧光参数5)MultiColor紫外激发多光谱荧光成像(选配)6)FPs荧光蛋白成像:GFP、YFP、RFP、BFP等(选配)荧光激发光源组:全LED光源,包括620nm红光、5700K冷白光、735nm远红光、365nm紫外光,445nm品蓝光,470nm蓝光,505nm青光,530nm绿光,590nm琥珀色光等高分辨率CCD相机1)图像分辨率:1360×1024像素2)时间分辨率:在最 高图像分辨率下可达每秒20帧具备7位滤波轮,标配叶绿素荧光滤波器,根据用户需要可定制紫外激发多光谱荧光和GFP、RFP、YFP、BFP等荧光蛋白专用滤波器FluorCam叶绿素荧光成像分析软件功能:具Live(实况测试)、Protocols(实验程序选择定制)、Pre–processing(成像预处理)、Result(成像分析结果)等功能菜单自动测量分析功能:可设置一个实验程序(Protocol)自动无人值守循环成像测量,重复次数及间隔时间客户自定义,成像测量数据自动按时间日期存入计算机(带时间戳)成像预处理:程序软件可自动识别多个植物样品或多个区域,也可手动选择区域(Region of interest,ROI)。手动选区的形状可以是方形、圆形、任意多边形或扇形。软件可自动测量分析每个样品和选定区域的荧光动力学曲线及相应参数,样品或区域数量不受限制(>1000)输出结果:高时间解析度荧光动态图、荧光动态变化视频、荧光参数Excel文件、直方图、不同参数成像图、不同ROI的荧光参数列表等应用案例:1.抗病毒基因研究:叶绿素荧光成像与GFP成像联合分析法国国家农业科学研究院一直致力于马铃薯y病毒组的抗病基因研究,通过不同基因编辑处理方法,验证抗病毒分子机制。相关研究中,研究人员利用FluorCam多光谱荧光成像系统的GFP荧光蛋白成像功能,定量分析感染面积与病毒积累量,从而直观地反映了不同基因功能对拟南芥病毒抗性的影响。同时,叶绿素荧光成像则反映病毒对光合系统的损伤,同步提供植物的光合表型信息。参考文献:Zafirov D, et al. 2021. When a knockout is an Achilles' heel: Resistance to one potyvirus species triggers hypersusceptibility to another one in Arabidopsis thaliana. Mol Plant Pathol. 22: 334–347Bastet A, et al. 2019. Mimicking natural polymorphism in eIF4E by CRISPR‐Cas9 base editing is associated with resistance to potyviruses. Plant Biotechnology Journal 17: 1736–1750Bastet A, et al. 2018. Trans-species synthetic gene design allows resistance pyramiding and broad-spectrum engineering of virus resistance in plants. Plant Biotechnology Journal: 1–132.不同颜色凌霄叶片的叶绿素荧光与紫外激发多光谱荧光成像分析(易科泰EcoTech®实验室)产地:欧洲
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- 2023-07-10 17:59:15荧光生物显微镜应用于皮屑真菌检测
- 荧光生物显微镜助力前海人寿韶关医院皮屑真菌检测相信很多人受过脚癣、甲癣等真菌性皮肤病的困扰,药店买点药膏涂涂,但是却反反复复。现在诊断不仅靠临床表现,并且有更准确的真菌荧光生物显微镜检测法,荧光生物显微镜MF23-M近期交付前海人寿韶关医院,助力皮屑真菌检测。现在的荧光真菌镜检检测范围广,操作简单快捷,灵敏度高,通过荧光染料与细胞壁多糖结合,从而标记真菌,在荧光生物显微镜下进行观察。快速定性检测人体组织及体液中可能存在的各类真菌。近期,明美荧光生物显微镜MF23-M安装于前海人寿韶关医院,大大提高了真菌检出灵敏度和特异性,避免假阳性并且缩短了镜检时间,有利于准确诊断。荧光生物显微镜MF23-M采用双LED光源,使用简单方便,观察清晰,拍照色彩还原度和清晰度高,采用拉杆式切换荧光通道,工程师现场安装测试效果后,用户表示很满意。免责声明本站无法鉴别所上传图片、字体或文字内容的版权,如无意中侵犯了哪个权利人的知识产权,请来信或来电告之,本站将立即予以删除,谢谢。来源:https://www.mshot.com/article/1766.html
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