食物中过敏原蛋白质的LC/MS/MS分析方法

在食物过敏原的检测方法中，比较常用的定量法有ELISA法，定性法有PCR法。这两种都是比较简便的方法，但是ELISA法由于对检测对象的过敏原有所限制，所以很难进行多种过敏原同时分析，而且会由于交叉反应导致检测错误。而PCR法是以DNA为检测对象，有时无法直接检测出过敏原蛋白质。

因此，为了建立统一检测多种过敏原的方法，人们开始尝试采用基于LC/MS技术（把过敏原蛋白质酶解后的肽段作为分析对象）的同时分析法。另外，为了防止过敏原种类不同而导致检测错误，人们对不同种类特异性肽段的同时检测的研究也在不断深入。

本篇应用介绍了采用LC/MS/MS法对牛奶和鸡蛋中典型的过敏原蛋白质（肽段）进行分析的实例。

实验部分

以α-酪蛋白、β-乳球蛋白、卵清蛋白这3种过敏原蛋白质为对象，把还原烷基化之后经过胰蛋白酶消化后的样品作为检测样品。为提高实际样品分析时的稳定性，对每一种过敏原蛋白质进行6种肽段分析，并对每一种肽段设置了1～4组的SRM转换。

随后，采用C18色谱柱TSKgel ODS-100V在含有0.1%甲酸的水和乙腈的梯度洗脱条件下进行分析。

分析条件

仪器：TripleTOF 5600+ (SCIEX)

色谱柱：TSKgel ODS-100V (2.0mmI.D.×150 mm, 3 µm)

流动相A：含0.1% HCOOH的H₂O

流动相B：含0.1% HCOOH的CH₃CN

梯度条件：B conc. (0 min) 10 % → (15-17 min) 100 % → (17.1-20 min) 10 %

流速：0.2 mL/min

柱温：40 ℃

进样体积：2 µL

离子源：电喷雾离子源

扫描方式：正离子模式

实验结果

3种蛋白质酶解后肽段的SRM色谱图

结 论：

检测食品中过敏原蛋白质时，相比ELISA法或PCR法等传统方法，LC/MS/MS法的可靠性更高，且可以高通量、一次检测多种过敏原蛋白质。

TSKgel ODS-100V色谱柱采用了独特的表面键合及封端技术，有效YZ了碱性、酸性和金属螯合物的二次相互作用。3µm粒径的色谱柱非常适合用于高通量LC/MS分析，可以提供快速、高分辨率的分离。