高效液相色谱为什么会出现双峰？

        明明实验时只分析一种物质，为什么峰图会出现双峰呢？通常情况下，正确的峰型应该是尖锐而对称的，出现双峰应该是实验过程中有错误的步骤导致的。液相色谱出现“双峰”的原因有很多。一般有以下几种原因：色谱柱、溶剂、进样量、样品特性和pH值。恒谱生uHPLCs简单介绍其中色谱柱、溶剂因素导致出现双峰及解决办法。

        色谱柱

        如何判断是色谱柱出现问题导致双峰出现呢？操作人员分析单一纯物时，如果每个色谱峰都出现双峰，可以确定是色谱柱头受损或者是柱头污染了。如果是色谱柱正常，进样量少并且色谱峰形为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这种情况可能是柱头受堵。可以将色谱柱反过来接，用流动相或其它溶剂冲洗掉堵在柱头的残留物，然后再反过来，一般都能解决。如果反复还是不能解决问题，可能是柱头塌陷的问题。恒谱生液相色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上，但是柱子使用一段时间后，可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶造成柱头塌陷，这时可补加硅胶填料使柱效恢复。每次使用完色谱柱后，需用洗脱能力强的洗脱液冲洗，以延长液相色谱分析柱的寿命。

        色谱柱头塌陷的原因有很多，比较常见的是色谱泵压力过高，填料压碎产生空隙。除此之外还有诸如装填时压力过低，不密实；流动相溶解填料，造成空隙；色谱柱入口筛板堵塞等原因。恒谱生色谱筛板能有效地拦截样品、流动相或管线及密封件的颗粒物对色谱柱的污染，保护色谱柱和仪器。筛板使用一段时间后，拦截的污染物会堵塞筛板，因此需要定期更换。但是相较于损坏色谱柱，更换一个筛板显得性价比更高，成本更低廉。

        溶剂问题

        反相色谱流动相多为甲醇、乙腈、水，实验中往往会从中加各种添加剂以改善分离性能。有时候为了样品的溶解性或稳定性加入了一点的缓冲液，但是缓冲液的酸碱性可能会导致样品转化，从而产生双峰现象。可以更换缓冲液或者更换流动相试一试。

        影响双峰出现的原因还有很多，比如样品超过柱载量，从而导致二次分配；仪器间隔记录时间太短都有可能造成双峰出现。因此具体情况要具体分析，以上仅供各位色谱工作者参考。想知道更多色谱相关咨询，可关注恒谱生uHPLCs！