从比色皿到微孔板：酶标仪光程校正到底解决了什么？

? 液体体积与垂直光程的线性关系：

在垂直光路检测模式下，检测光路垂直于孔底平面穿过液体，光程长度由孔内液柱的垂直高度决定。在孔横截面积恒定的条件下，液体体积与液柱高度呈正比，即体积越大，垂直光程越长。

? 弯月面导致的液面不均匀性：

由于液体表面张力的作用，液面在与孔壁接触处形成凹形弯月面，导致液面在径向方向上呈非平面分布。具体表现为孔中心区域的液面高度略低于孔边缘区域，使得孔内不同径向位置的光程存在微小差异。

? 蒸发引起的光程动态变化：

在开放体系或长时间动力学检测过程中，液体蒸发导致孔内液体体积逐渐减少，进而引起液柱高度下降，使得垂直光程长度随时间发生动态变化。

? 平底孔的光程特征：

平底微孔板的孔底为平面结构，孔底各处在垂直于光路方向上具有相同的几何厚度。当检测光路垂直穿过时，孔内不同径向位置的光程保持一致，光程分布具有均一性。

U形底孔的光程特征：

U形底微孔板的孔底呈曲面结构，孔底中心位置低于边缘位置。当检测光路垂直穿过时，孔中心区域的液体层厚度最大，向边缘方向液体层厚度逐渐减小，导致光程随径向位置呈现连续梯度变化。

 V形底孔的光程特征：

V形底微孔板的孔底呈锥形结构，液体汇聚于孔底中心锥尖处。检测光路垂直穿过时，孔中心区域的光程显著大于孔边缘区域，光程分布呈现中心高、边缘低的特征。

光程校正是一项稳定可靠的技术手段，可以消除不同加样体积的物理差异，实现高通量数据的可比性，同时可以实现微孔板检测结果与 1cm 标准光程比色皿检测数据的统一对标；依托预先标定的 K 因子与待测物质的摩尔消光系数，该方法可直接完成样品浓度的定量计算，无需依赖标准曲线完成校准。Feyond系列酶标仪和ReaderIt分析软件组合是优秀的分析工具，此外Feyond系列酶标仪还可以搭配uNano超微量检测板，上样量低至2uL，有16/96孔两种通量选择，无需复杂换算直接定量DNA、RNA、蛋白浓度。