文献速递：工程化冻融肿瘤细胞递送双功能基因药物，为黑色素瘤免疫治疗开辟新路径

近日上海药物所李亚平团队在Advanced Materials（IF 26.8）上发表了题为“Cryo-shocked Tumor-Reprogrammed Sonosensitive Antigen-Presenting Cells Improving Sonoimmunotherapy via T cells and NK cells immunity”的研究论文。该研究设计了一种基于基因工程化肿瘤细胞的免疫治疗策略，通过同时激活T细胞和NK细胞，启动抗肿瘤固有免疫和适应性免疫，从而增强对乳腺癌、结直肠癌、黑色素瘤的免疫治疗效果。

研究团队针对黑色素瘤免疫治疗的两大核心痛点 —— 效应 T 细胞浸润受限、肿瘤微环境免疫抑制，设计了CXCL9-ABEPCSK9双功能质粒：一方面通过腺嘌呤碱基编辑（ABE）敲低免疫抑制因子 PCSK9，恢复 CD8+T 细胞的杀伤活性；另一方面过表达趋化因子 CXCL9，主动招募 CD8+T 细胞进入肿瘤微环境。

为实现该基因药物的安全、靶向递送，团队打造了创新的细胞递送载体：将双功能质粒包封于脂质体形成 LipoC9AP 纳米颗粒，再通过静电作用锚定在液氮处理（LNT）的肿瘤细胞表面，构建出 LNT@LipoC9AP 递送系统。液氮处理后的肿瘤细胞完全丧失致病性和增殖能力，却能保留完整的结构和肿瘤归巢特性，如同 “特洛伊木马” 实现基因药物的靶向运输；同时其仍具备免疫原性，可激活树突状细胞，辅助启动抗肿瘤免疫。

为进一步提升肿瘤靶向性，团队在 LNT 细胞表面修饰RGD4C 肽段，构建出 R-LNT@LipoC9AP。该肽段可特异性结合黑色素瘤细胞高表达的 αvβ3 整合素，大幅提高了基因药物在肿瘤部位的富集效率。

一系列体内外实验证实，该递送系统展现出优异的抗肿瘤效果和生物安全性：

体外：

LNT@LipoC9AP 可高效上调 CXCL9 表达、敲低 PCSK9，显著促进 CD8+T 细胞的招募与活化，增强其对肿瘤细胞的细胞毒性；

体内皮下瘤模型：

该系统能显著抑制肿瘤生长，甚至实现部分小鼠肿瘤完全消退，同时诱导长效抗肿瘤免疫记忆，有效预防肿瘤复发；

肺转移模型：

依托 LNT 细胞的归巢能力，系统可精准靶向肺部转移灶，大幅减少转移结节，显著提升荷瘤小鼠存活率；

安全性：

全程未观察到小鼠体重异常、主要器官病理损伤，也无脱靶编辑和系统性细胞因子风暴，生物安全性良好。

单细胞 RNA 测序进一步揭示了其作用机制：该系统可显著增加肿瘤微环境中树突状细胞和效应型、记忆型 CD8+T 细胞比例，通过增强 MHC-I 抗原呈递、促进免疫细胞间通讯，全面激活 CD8+T 细胞介导的抗肿瘤免疫反应。而 R-LNT@LipoC9AP 通过主动靶向作用，进一步提升基因药物肿瘤富集，让抗肿瘤效果更优。

该研究首次将 RGD4C 肽段稳定表达于冻融肿瘤细胞表面用于基因编辑药物递送，所构建的递送系统兼具自体源性、靶向性、安全性和可扩展性 —— 可从患者自身肿瘤细胞制备 LNT 载体，最大程度降低免疫排斥，实现个体化治疗，为黑色素瘤及其他实体瘤的基因免疫治疗提供了极具临床转化潜力的新方案。

Nano-300 超微量分光光度计，在本研究的核酸、蛋白定量检测环节承担关键作用，是保证实验准确性和标准化的重要仪器，具体应用于两大核心流程：

提取 B16F10 细胞的总 RNA 后，通过 Nano-300 检测 RNA 的浓度和纯度，为后续实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）实验提供精准的上样量依据，确保 CXCL9、PCSK9 等基因的表达量检测结果可靠；

在 LipoC9AP 纳米颗粒制备、LNT 细胞载药效率检测等环节，利用 Nano-300 对质粒 DNA 进行超微量定量，精准确定质粒的使用浓度，保证脂质体包封、细胞表面锚定等实验步骤的标准化操作，同时准确计算 LipoC9AP 在 LNT 细胞表面的装载效率，为递送系统的构建和表征提供关键数据支撑。

简言之，Nano-300 凭借超微量检测的高灵敏度和准确性，为研究中核酸相关实验的定量分析提供了核心技术支持，是保障实验数据精准、实验流程可重复的重要工具。