瘦肉精是一类药物的统称，能够抑制动物脂肪生成，促进瘦肉生长的物质都可以称为“瘦肉精”，其中较常见的有克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等。 进入牲畜体内后能够改变养分的代谢途径，促进动物肌肉生长，尤其是促进骨骼肌蛋白质的合成，加速脂肪的转化和分解，提高牲畜的瘦肉率。
近年来，因食用被“瘦肉精”污染的食物导致中毒事件屡有发生，且后果极其严重，引起了世界各国的高度重视。为了保证畜产品质量安全，保护人类健康，许多国家都禁止在食源性动物的生产中使用盐酸克伦特罗，美国食品与药品监督管理局（FDA）将肉品中的盐酸克伦特罗残留作为必检项目，欧盟也严禁在饲料中添加“瘦肉精”类药物。中国虽然于2000年提出禁止使用“瘦肉精”类药物，但在畜牧业生产中“瘦肉精”的使用仍屡禁不止。
本文参考SN/T 1924-2011 《进出口动物源食品中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》标准方法，将试样中残留的克伦特罗、莱克多巴胺用β-葡萄糖醛甙酶/芳基硫酸酯酶酶解，乙酸铵缓冲溶液提取，正己烷脱脂，水相溶液经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，HPLC-MS/MS测定’酸化乙腈提取，HLB固相萃取柱净化，氮吹浓缩，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。
1.仪器和耗材
1.1
睿科产品支撑
V20 垂直震荡器
? 通量高 速度快
提取效果好
Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪
? 远程监控，安全健康
稳定的样品平行性和再现性
全净化过程自动化 高效 快捷
Auto EVA 60 高通量全自动平行浓缩仪
? 自动化程度高
全方位的安全防护
高性能 大批量的样品浓缩
1.2
耗材
MCX固相萃取柱（150mg/6ml）
1.3
试剂
1.乙腈（色谱纯）
2.甲醇（色谱纯）
3.甲酸（色谱纯）
4.乙酸乙酯（色谱纯）
5.正己烷（色谱纯）
6.乙酸铵
7.氨水
8.超纯水
2.样品制备
称取5g兔肉试样，置于50ml离心管中，添加50ul同位素内标工作液，加入20ml乙酸铵缓冲溶液及4颗8mm钢珠，置于垂直震荡器中震荡6min（具体方法参数见表1），4℃下8000r/min离心5min，收集上清液并加入20ml正己烷，混匀后4℃条件下12000r/min离心5min，弃正己烷层，水相溶液过滤后备用。
表-1 V20垂直震荡方法
2.1
净化和浓缩
依次用3mL甲醇、3mL水和3mL盐酸溶液（0.9%）活化小柱，再将上述滤液以1.0mL/min速度加载到固相萃取小柱上，再一次用3mL盐酸溶液、3mL水、3mL 50%甲醇和3mL正己烷淋洗小柱，弃去淋洗液，真空抽干，用3mL洗脱液进行洗脱，收集洗脱液，洗脱液用Auto EVA 60高通量全自动平行浓缩仪45℃下吹干，加入1mL0.1%甲酸溶液溶解残渣，过0.22μm滤膜后，供HPLC-MS/MS测定。
2.2
固相萃取条件如图-1
图-1 Fotector Plus固相萃取方法
3.液相液质条件
3.1
液相条件
3.2
梯度洗脱条件
3.3
质谱参数
3.4
MRM参数
4.结果与讨论
本次实验于兔肉中加入2种兽药标准品混标标准物质进行加标回收验证（添加含量为0.1ug/kg，n=6），检测结果如表-2所示，加标回收在92.1-109.2%之间，RSD在10%以内，说名该方案可以运用于兔肉中克伦特罗和莱克多巴胺的检测。
表-2 兔肉中克伦特罗和莱克多巴胺
加标回收率及RSD值（n=6）
5.总结
本解决方案操作方便，提取、净化、浓缩效率高，回收率满足GB/T 27404-2008 《实验室质量控制规范 食品理化检测》中规定的质量控制要求。V20 垂直震荡器通量和效率高，可以有效避免传统均质因清洗不到位带来的交叉污染；Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪采用全自动操作，可以排除人员操作带来的误差，从活化到上样、洗脱一步到位，六通道同时进行；Auto EVA 60系列全自动氮吹浓缩仪可自动完成样品的浓缩，采用氮吹针追随的方式使得浓缩进程更快，并节省氮气，真正为批量检测提供帮助。
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