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低丰度/稀有菌株筛选,还在“千淘万漉”吗?

来源:长春长光辰英生物科学仪器有限公司      分类:应用方案 2024-11-22 11:13:08 13阅读次数
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微生物群落中数量不占优势的低丰度/稀有菌株,往往在群落中扮演着重要角色,且对生态系统的稳定性和功能发挥至关重要。对此类菌株的筛选目前多采用人工单克隆挑取方法,该方法捕获率低、周期长、重复挑取率高、且下游检测成本高。

在低丰度/稀有菌株筛选中,

运气好时是

“千淘万漉虽辛苦,吹尽狂沙始到金”

更多时候是

”千淘万漉好辛苦,吹尽狂沙没有金“!



RAcolony高通量菌落智能筛选系统在培养皿原位,基于菌落微观图像及拉曼光谱表型进行“去重复”分析,高效获取低丰度菌/稀有菌株,提高“淘金”效率。






第一步:样品

用20种肠道菌株构建模拟样本:每个样本包含3种低丰度物种(1%,0.8%,0.5%),每个平皿保证300个左右菌落数,共8个平皿(重复),其中每皿所含的3种低丰度物种分布在不同菌株上。





第二步:开始“淘金





第三步:“淘金结果
相同挑取菌落数下,图像去重和拉曼去重后的物种覆盖度显著高于无差别随机挑取 (Fig. 1A和B)
Fig.1 不同挑取数下物种覆盖度比较
A)不同挑取数下图像去重和无差别随机挑取下的物种覆盖度比较;B)不同挑取数下拉曼去重和无差别随机挑取下的物种覆盖度比较。



利用图像“去重”筛选,在含有3株低丰度物种的微生物群体中,挑取总菌落数的1/10,即40个菌落(Fig. 2A和B),去重筛选后的物种覆盖度接近85%,此时丰度低至0.5%的稀有物种的捕获率在80%以上。

Fig.2 图像去重菌落挑取数量与物种覆盖度和低丰度物种捕获率。
A)低丰度物种存在群体中,菌落挑取数量与物种覆盖度的关系图;B)不同低丰度阈值菌株的捕获效率 。

对于拉曼“去重”筛选,同样挑取菌落总数的1/10(40个菌落)(Fig. 3A和B),拉曼去重筛选后的物种覆盖度接近95%,且丰度为0.5%的低丰度物种捕获率为100%。
Fig.3拉曼去重菌落挑取数量与物种覆盖度和低丰度物种捕获率。
 A)存在低丰度物种群体中,菌落挑取数量与物种覆盖度的关系图;B)不同低丰度阈值菌株的捕获效率 。


菌落筛选别再“千淘万漉”




RAcolony可以让低丰度菌株筛选更高效!



END


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最近更新:2024-09-05 09:08:45
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