核酸助沉剂Carrier RNA助力低丰度SARS-CoV-2假病毒核酸检测

1. 核酸助沉剂概念及作用

荧光定量PCR是分子诊断主流技术，包括核酸提取和PCR扩增两个环节，两者共同决定了该检测方法的评测参数。以最直观最关键的检测灵敏度指标来看，只有实现了提取环节最优化和PCR扩增环节最优化的情况下，检测灵敏度的结果才更可信。检测灵敏度显示了检测试剂的检测下限，对于荧光定量PCR而言，即一定样本浓度下的病毒核酸检出率。

Carrier RNA，中文名载体RNA，又叫核酸助沉剂。在核酸提取环节，提取使用到的离心管壁多是聚丙烯的材料，管壁上有静电，会吸附核酸。在提取纯化过程中采用Carrier RNA 可帮助核酸去除静电效应，保证核酸能很好被吸附到纯化柱上，提高洗脱效率，从而达到尽可能多的回收样本中核酸！

2. 核酸助沉剂常见类型

作为核酸沉淀的辅助物质，核酸助沉剂有多种类型。

类型	代表物质	作用原理
多聚糖	糖原	RNA在高盐、无水乙醇环境中溶解度很低，通过高速离心可发生沉淀。当RNA浓度很低时，微量RNA不足以形成沉淀。在上述环境条件下，糖原也不可溶并可与RNA共沉淀，形成可视化沉淀。
核酸混合物	PolyA钾盐、大肠杆菌总RNA、酵母总RNA、tRNA等	减少吸附损失，降低核酸酶攻击待提取核酸的概率。
其他	线性化丙烯酰胺	减少吸附损失

3. 产品介绍——上海翌圣生物生产的核酸助沉剂
翌圣生物Carrier RNA是酵母来源的RNA，无DNase、RNase酶残留，蛋白和DNA残留含量极低。可用于病毒核酸提取、微量DNA提取等实验，提取的核酸可用于后续RT-PCR，RT-qPCR等实验。产品分为液体和冻干型粉末制剂，便于直接使用和长距离运输、保存。

产品名称	产品编号	规格	保存条件
Carrier RNA, 6 μg/μL	19701ES03	1 mL	-20℃保存，可保存2年
Carrier RNA Powder, 216 μg/tube	19703ES01	1 tube	室温保存，可保存1年
Carrier RNA Powder, 310 μg/tube	19704ES01	1 tube	室温保存，可保存1年

本品为核酸混合物，产品使用非常简单，在纯化核酸过程中通过添加微克量（μg）的Carrier RNA，即可实现提升低至皮克级别（pg）微量核酸的沉淀效率，达到提升试剂检测灵敏度的目的。

其作用原理主要是通过混入大量核酸（Carrier RNA），减少了目标核酸物质的管壁吸附损失，进而提高微量的核酸纯化柱上的结合和洗脱效率，同时降低了提取环境中的RNase降解微量RNA的概率。

4. 应用案例

Carrier RNA的加入有助于低丰度SARS-CoV-2假病毒核酸检测

使用磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒（产品货号：19387ES），提取不同浓度的SARS-CoV-2假病毒样本核酸，后续使用新冠检测试剂盒进行检测N基因。结果显示，添加Carrier RNA后，具有更高的提取效率，使下游检测更灵敏。

Ct值	0 copies/mL	125 copies/mL	250 copies/mL	500 copies/mL	1000 copies/mL	NTC
不加carrier RNA	N/A; N/A; N/A	N/A; N/A; N/A	N/A; 40.4; N/A	N/A; 40.16; 40.88	38.05; 38.02	N/A; N/A; N/A
加carrier RNA	N/A; N/A; N/A	N/A; 40.54; N/A	40.2; 40.29; 38.95	38.61; 39.03; 38.59	37.53; 36.34

图片.png

见图1-1

Carrier RNA放置于65℃不同时间（3d,6d,9d）后，与提取性能标准保存条件一致

将Carrier RNA粉末分别放置于65℃ 3d，6d，9d进行加速试验测试，测试方案为：使用磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒（产品货号：19387ES），提取不同浓度的SARS-CoV-2假病毒样本核酸，后续使用新冠检测试剂盒进行检测orf1ab和N基因。结果显示，与标准保存条件（-20℃）相比，置于65℃保存9天的Carrier RNA，性能不发生变化。定量仪器：Biorad CFX96，核酸提取仪：上海儒克生物 Purifier 32 核酸纯化仪。

VIC：

Ct值	0 copies/mL	250 copies/mL	500 copies/mL	1000 copies/mL	2000 copies/mL	NTC
65℃ 3天		36.32; 36.03; 36.26	35.16; 35.41; 39.26	35.19; 36.58; 35.44	33.80; 33.55
65℃ 6天		36.28; 35.61; 35.42	36.40; 35.21; 35.23	35.29; 34.37; 34.09	33.91; 33.21
65℃ 9天		36.40; 35.53; 37.41	36.24; 36.07; 36.63	34.34; 34.21; 34.25	33.97; 33.54
-20℃保存	N/A; 39.47; 39.86	36.40; 36.41; 38.01	35.55; 35.48; 36.01	33.14; 34.51; 34.50	33.92; 33.00	N/A; 40.15; 39.39

FAM：

Ct值	0 copies/mL	250 copies/mL	500 copies/mL	1000 copies/mL	2000 copies/mL	NTC
65℃ 3天		36.88; 37.07; 36.34	35.21; 35.62; 40.02	35.32; 36.61; 35.49	34.13; 33.86
65℃ 6天		35.98; 35.68; 35.32	37.34; 35.56; 35.39	35.69; 34.53; 34.14	34.35; 33.47
65℃ 9天		36.29; 36.20; 37.63	36.60; 35.86; 36.31	34.83; 34.41; 34.61	34.00; 33.58
-20℃保存	N/A; N/A; N/A	36.06; 36.27; 39.08	35.63; 36.04; 37.43	33.5; 35.11; 34.49	34.09; 33.09	N/A; N/A; N/A

图片.png

见图2-1、图2-2

翌圣Carrier RNA V.S. Q同类产品

VIC：

Ct值	0 copies/mL	125 copies/mL	250 copies/mL	500 copies/mL	1000 copies/mL	NTC
YEASEN	N/A; N/A; N/A	N/A; N/A; N/A	38.76; 38.47; 39.53	38.83; 37.60; 37.82	37.91; 37.17	N/A; N/A; N/A
Q品牌	N/A; N/A; N/A	N/A; 40.01; N/A	N/A; 39.57; N/A	37.42; 39.06; 38.85	N/A; 36.04

FAM：

Ct值	0 copies/mL	125 copies/mL	250 copies/mL	500 copies/mL	1000 copies/mL	NTC
YEASEN	N/A; N/A; N/A	N/A; N/A; 38.06	38.92; 37.44; N/A	35.71; 38.51; 36.36	35.31; 34.59	N/A; N/A; N/A
Q品牌	N/A; N/A; N/A	N/A; 38.85; N/A	38.61; 36.75; 39.58	37.41; 36.43; 35.70	36.25; 35.79

图片.png

见图3-1、图3-2

5、相关产品

Carrier RNA提供成管冻干粉及液体类型，可直接用于各类应用场景。

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Carrier RNA, 6 μg/μL	19701ES03	1 mL	635.00
Carrier RNA, 6 μg/μL	19701ES08	5 mL	询价
Carrier RNA Powder, 216 μg/tube	19703ES01	1 tube	75.00
	19703ES80	100 tube	询价
	19703ES92	1000 tube	询价
Carrier RNA Powder, 310 μg/tube	19704ES01	1 tube	95.00
	19704ES80	100 tube	询价
	19704ES92	1000 tube	询价

HB201223

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