微量核酸提取的“破局者”
在分子生物学实验中,核酸的提取和纯化是至关重要的步骤。然而,在微量样本或低丰度核酸的情况下,核酸的提取效率往往较低,难以满足后续实验的需求。Carrier RNA作为一种核酸助沉剂,能够有效提高微量核酸的提取效率,为分子生物学研究提供了有力支持。
核酸助沉剂常见类型
作为核酸沉淀的辅助物质,有多种类型:
Carrier RNA概念及作用
荧光定量PCR是分子诊断主流技术,包括核酸提取和PCR扩增两个环节,两者共同决定了该检测方法的评测参数。以最直观最关键的检测灵敏度指标来看,只有实现了提取环节最优化和PCR扩增环节最优化的情况下,检测灵敏度的结果才更可信。检测灵敏度显示了检测试剂的检测下限,对于荧光定量PCR而言,即一定样本浓度下的病毒核酸检出率。
Carrier RNA,中文名载体RNA,又叫核酸助沉剂。Carrier RNA是片段在200—3000 nt之间的RNA混合物,常见类型包括PolyA钾盐、大肠杆菌总RNA、酵母总RNA、tRNA等。这些RNA混合物在高盐、无水乙醇环境中溶解度很低,通过高速离心可发生沉淀。当RNA浓度很低时,微量RNA不足以形成沉淀,而Carrier RNA的加入可以提供足够的核酸量,促进沉淀的形成。在提取纯化过程中采用Carrier RNA 可帮助核酸去除静电效应,保证核酸能很好被吸附到纯化柱上,提高洗脱效率,从而达到尽可能多的回收样本中核酸!
Carrier RNA的作用原理
减少吸附损失:在核酸提取过程中,离心管壁(多为聚丙烯材料)上的静电会吸附核酸,导致核酸提取收量降低。Carrier RNA的加入可以去除静电效应,保证核酸能很好地被吸附到纯化柱上,提高洗脱效率。
降低核酸酶攻击概率:在提取环境中,RNase等核酸酶可能会降解微量RNA。Carrier RNA的存在可以减少目标核酸物质的管壁吸附损失,进而降低核酸酶攻击待提取核酸的概率。
提高结合和洗脱效率:Carrier RNA通过混入大量核酸,提高了微量的核酸在纯化柱上的结合和洗脱效率,从而实现了低至皮克级别微量核酸的高效沉淀。
Carrier RNA产品介绍
翌圣生物Carrier RNA是酵母来源的RNA,无DNase、RNase酶残留,蛋白和DNA残留含量极低。可用于病毒核酸提取、微量DNA提取等实验,提取的核酸可用于后续RT-PCR,RT-qPCR等实验。产品分为液体和冻干型粉末制剂,便于直接使用和长距离运输、保存。我们根据不同客户的应用需求,提供不同规格/装量的Carrier RNA,也接受规格/装量定制服务。Carrier RNA的生产,我们有成熟的冻干工艺,严格的质检,确保批次间的稳定性。
Carrier RNA使用说明
Carrier RNA为核酸混合物,产品使用非常简单,以病毒核酸提取为例,取1管冻干粉,短暂离心后,加入216 μL RNase-free ddH2O溶解为1 μg/μL工作液。之后每份样本裂解液中加入6 μL Carrier RNA(即6 μg)。如果是6 μg/μL的溶液形式,每份样本中加入 1 μL(即6 μg),然后继续按照相应核酸提取产品的说明书进行后续步骤,达到提升试剂检测灵敏度的目的。
应用案例
Carrier RNA的加入有助于低丰度SARS-CoV-2假病毒检测
使用磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒,提取不同浓度的SARS-CoV-2假病毒样本核酸,后续使用检测试剂盒进行检测N基因。结果显示,添加Carrier RNA后,具有更高的提取效率,使下游检测更灵敏。
图1 .添加Carrier RNA对比不添加Carrier RNA的检测灵敏度测试
其他核酸提取相关原料
翌圣生物
翌圣生物科技(上海)股份有限公司成立于2014年,是一家聚焦生命科学产业链上游核心原料,从事核苷酸、蛋白、细胞和类器官四大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业。公司兼备核心技术自主研发和规模化生产能力,核心产品数量达数千种,覆盖分子克隆、qPCR、NGS、体外转录、抗体、蛋白纯化及分析、细胞培养、转染、报告基因检测和类器官等多种系列,广泛应用于生命科学研究、诊断检测和生物医药等领域。
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