等度洗脱、梯度洗脱怎么选？看过来

PART . 01

图1  等度洗脱分析方法流动相示意图

图2  梯度洗脱分析方法流动相示例图

图9-1为采用C₁₈色谱柱对14种毒物标准品在不同模式下进行分离的案例。

图（a）使用50%的乙腈作为流动相，采用等度洗脱的方式进行分离。由于样品的保留范围非常广，从而导致较早洗脱出来的峰1-6之间的分离度很差，而峰13、14的保留时间非常长，且色谱峰峰形非常宽，峰高不足，进而导致检测结果的准确度降低。为了能够使相邻的色谱峰完全分离，以pH=2.5的磷酸盐缓冲液作为流动相A，乙腈为流动相B，并对流动相B的比例进行了调整。图（b-f）是使用10%、25%、45%、52%和75%流动相B进行等度分离的14种化合物出峰情况，可以看出在不同浓度洗脱条件下化合物可以得到良好的分离；图（g）为梯度洗脱的分离效果。

此图来源于《现代液相色谱技术导论》第三版

由本案例可以看出，当待分析组分复杂、不同组分保留时间范围广、分离效果不好时，应采用梯度洗脱的模式。

液相色谱中，输液泵的类型直接决定了洗脱方法的拓展性，特别是进行梯度洗脱时灵活调节流动相比例的能力。因此，根据分析方法选择合适的输液泵至关重要。

目前常用的输液泵主要分为三类：

1.一元等度泵：

仅支持单一流动相或固定比例的混合流动相进行等度洗脱。

适用场景： 分析方法固定、仅需等度洗脱且流动相组成简单的常规检测（如部分质量控制QC应用）。其优势在于结构简单、成本较低。

2.二元高压泵：

由两个高压泵通道组成，可在高压下精确混合两种溶剂，实现高精度的梯度洗脱。

适用场景：需要精确控制二元梯度洗脱的方法开发、复杂样品分析及常规分析。梯度精度高，系统延迟体积小，适合高灵敏检测。

3.四元低压泵：

通过比例阀在低压下混合最多四种溶剂，可实现多溶剂梯度洗脱。

适用场景：用到三种或四种流动相进行方法开发、筛选的科研或研发工作，或者常规分析中需要灵活切换多种流动相的情况。优势在于溶剂选择的灵活性，但梯度精度和系统延迟体积通常略逊于二元高压泵。

选择建议：

因此，对梯度精度的要求、预算以及未来分析方法拓展性都是选择泵类型的重要考量因素。