基于表面增强拉曼光谱技术的血液中苯二氮卓类药物快速检测方法

（1）样品预处理

血液加标样品一:取两份500μL空白血液样品于离心管中，分别加入50μL的10ug/mL地西泮标准工作溶液，得到两份地西泮浓度为1ug/mL的血液加标样品，分别记为α和β。混匀后逐份加入2mL乙腈，充分振荡摇匀，离心。取上清液于样品管中。α样品加入0.1 g氯化钠溶液、0.4 g无水硫酸镁、25mg PSA;β样品加入0.1 g氯化钠、0.4 g无水硫酸镁、25 mg PSA以及10 mg C18，添加后快速震荡约10s，最后加入100uL纳米金溶胶，充分混匀后上机检测。空白对照:取空白血液500uL(不添加地西泮标准工作溶液)前处理及检测方法与β样品一致;检测方法对照:配制β的平行样品一份，该样品前处理方法与β样品相同，检测试剂不添加纳米金溶胶。

血液加标样品二:取四份500μL空白血液样品于离心管中，分别加入体积为50uL的10ug/mL阿普唑仑10ug/m L硝基安定、20ug/m L替马西泮、10ug/mL氯氮卓标准工作液，从而得到浓度分别为0.5ug/mL、0.5ug/m L、1ug/m L、0.5μg/mL的血液加标样品。标记为A,B,C,D。混匀后逐份加入2 mL乙腈，振荡摇匀后离心。取1mL上清液于样品管中，加入0.1 g氯化钠、0.4 g无水硫酸镁以及25 mg PSA和10 mg C18的混合物，快速振荡10 s左右后离心，取上清液作为待测溶液。取200μL纳米金溶胶(纳米金)，加入50μL待测液，充分混匀后上机检测。空白对照:取空白血液500mL，不添加标准溶液，前处理方法与样品A,B,C,D一致。

（2）设备搭建

图 1透射率测试搭建图

（1）苯二氮卓类药品标品的表面增强拉曼检测

将苯二氮卓类药品标准工作液按样品预处理最后一步进行检测，其相应拉曼特征峰归属及检出限如表1所示。根据标准溶液浓度梯度可确定各个苯二氮卓类药品的检出限，检测结果如图1所示，在检出限浓度能检测到清晰的拉曼信号，而空白对照在此特征峰附近无干扰，因此这些峰可作为定性依据。

（2）地西泮加标样品的表面增强拉曼检测

为了探究最优的前处理方法，选取苯二氮卓类药品中的地西泮做加标检测实验进行探究。将地西泮标准工作液按预处理样品方法进行处理检测，结果如图2所示，两个样品在检出限浓度均识别出明显的地西泮拉曼特征峰，而空白对照在此特征峰附近无干扰，因此这些峰可作为定性依据。对比结果发现，在相同的条件下，添加了PSA和C18混合物处理的样品出峰信号更强，远大于仅添加了PSA的样品。此外，图2中可知未使用纳米金溶胶进行检测，几乎没有信号，证明纳米金溶胶的使用大大增强了拉曼信号。这一结果表明PSA和C18协同作用能够更好地茎取、净化血液中各类杂质，极大地增强苯二氮卓类药物的检测效果，增强了检测灵敏度和准确度。

（3）不同苯二氮卓类加标样品的表面增强拉曼检测

将阿普唑仑、硝基安定、替马西泮、氯氨卓标准工作液及其相应加标样品(浓度依次分别对应为0.5pg/mL、0.5ug/mL、1ug/mL、0.5ug/m L)按血液加标样品一中β样品的方法进行检测，实验结果如图3所示。可以观察到4种不同的苯二氮卓类药品加标溶液均识别出相应的特征峰信号证明血液加标样品一的地西泮前处理方法适用于其他苯二氨卓类样品。这一结果表明该方法灵敏度高、准确度高，适用性广泛。

本文基于表面增强拉曼光谱技术，优化了前处理方法，可实现血液中多种苯二氮卓类药品的快速定性检测。前处理方法具有简单、快速、准确等特点。血液中阿普唑仑、硝基安定、替马西泮、地西泮、氯氮卓的快速检出。苯二氨卓类物质具备独特的拉曼特征峰组，因此通过建立拉曼谱图库可实现对此类违禁药品的筛査。前处理步骤简单，可短时间内完成对血液中多种毒物的现场快速检测。此外，该方法也可以为血液中其他毒物的现场检测提供研究方向和思路，有助于开发其他类别毒物的快速检测方法。