前 言
曲妥珠单抗，是抗Her2的单克隆抗体，它通过将自己附着在Her2上来阻止人体表皮生长因子在Her2上的附着，从而阻断癌细胞的生长，曲妥珠单抗还可以刺激身体自身的免疫细胞去摧毁癌细胞。临床上主要用于Her-2过度表达的转移性乳腺癌。
随着2025版《中国药典》注射用曲妥珠单抗公示稿的发布，单克隆抗体类生物药的检测标准再次成为行业的关注焦点。
本应用中我们采用了尺寸排阻色谱法，使用凝胶色谱柱TSKgel G3000SWXL参考上述公示稿，测定了注射用曲妥珠单抗含量和聚体含量。
溶液配置
供试品溶液：取本品适量，用流动相稀释制成每1 mL中约含曲妥珠单抗10 mg 的溶液。
对照品溶液：取曲妥珠单抗对照品，用流动相稀释制成每1 mL中约含曲妥珠单抗10 mg的溶液。
以磷酸盐缓冲液 (取磷酸二氢钾4.76 g、磷酸氢二钾2.61 g和氯化钾18.64 g，加水使溶解，调pH至6.2，用水稀释至1000 mL) 为流动相。
色谱柱
色谱柱用适合分离分子质量为10000～500000 Da蛋白质的亲水改性硅胶为填充剂 (7.8 mm×300 mm, 5 μm 或等效色谱柱) 。
分析条件
色 谱 柱：
TSKgel G3000SWXL（7.8 mm I.D.×300 mm , 5 μm）
流 速：
0.5 mL/min
样 品：
注射用曲妥珠单抗（10 mg/mL）
检 测：
UV@280 nm
进样体积：
20 μL
流 动 相：
磷酸盐溶液1.3
分析结果
图1 曲妥珠单抗注射液色谱图
图2 放大图
保留时间 （min） | 峰面积 （mAU*min） | 面积（%） | 分离度 | 拖尾 因子 | 理论 塔板数 | |
1 | 13.65 | 1.7248 | 0.43 | - | 1.09 | 2634 |
2 | 16.06 | 403.442 | 99.57 | 1.89 | 1.15 | 7613 |
结果与讨论
采用TSKgel G3000SWXL色谱柱，测定了注射用曲妥珠单抗含量和聚体含量，分别为99.57% (系统适用性要求, ≥98%)，聚体含量为0.43% (系统适用性要求，≤2%)，分离谱图见1，曲妥珠单抗峰理论塔板数为7613 (系统适用性要求, TP≥2000)，拖尾因子为1.15 (系统适用性要求, T≤1.8)，分离度为1.89 (系统适应性要求, Rs≥1.5) 。
实验结果表明：TSKgel G3000SWXL色谱柱满足药典标准规定的测定注射用曲妥珠单抗含量的要求。
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