称取1g(精确至0.01g)均质后的食品样品置于15mL离心管,加入内标标准工作液(0.1mg/L)20μL,静置30min后,准确加入5.0mL乙腈,涡旋混匀30s,超声30min。4℃下12000r/min离心10min。转移全部上清液至15mL离心管中,加入5.0mL水,涡旋混合30s,待HLB柱净化。
标准物质:
CDAA-S-290215-JA-1.2ml 乙腈中蜡样芽孢杆菌呕吐毒素(合成)标准溶液 100mg/L于乙腈,1.2ml
CDAA-S-290216-JJ-1.2ml 乙腈中蜡样芽孢杆菌呕吐毒素-13C6 标准溶液 20mg/L于乙腈,1.2ml
SPE柱:
SBEQ-CA6685 Poly-Sery HLB Pro SPE 小柱,200mg/6mL
活化:3mL甲醇;
平衡:3mL纯水依次活化;
上样:取食品样品提取液上样(如果上柱溶液粘度较大,过滤较为缓慢,可以1.2mL/min速度抽滤过柱),待上样液完全过柱;
淋洗:3mL纯水淋洗小柱;
洗脱:5mL甲醇洗脱,收集全部洗脱液,氮气浓缩至近干,残渣用1mL初始流动相(流动相A与B体积比为8:2)复溶,过微孔滤膜供上机测定。
液相条件
a) 色谱柱:Athena UPLC C18液相色谱柱(PN:LAEQ-2110HA 2.1×100mm,1.7μm,130A或PN:LAEQ-2110HU 2.1×100mm,1.8μm,300A);
b) 流动相:流动相A相为0.1%甲酸乙腈溶液,B相为0.1%甲酸-2.0mmol/L乙酸铵水溶液;
c) 流速:0.35mL/min;
d) 柱温:40℃;
e) 进样量:5μL;
f) 梯度洗脱程序见表1。
表1
质谱参考条件
a) 离子化模式:电喷雾电压离子模式(ESI?);
b) 质谱扫描方式:多反应监测(MRM);
c) 毛细管电压:3.5kV;
d) 离子源温度:150℃;
e) 脱溶剂温度:500℃;
f) 脱溶剂气流量:1000L/h;
g) 碰撞室压力:0.36Pa。
图1 标准曲线
图2 奶粉基质空白谱图
图3 奶粉基质加标谱图(2μg/kg)
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LC-MS级乙酸,≥99.7%
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LC-MS级水
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