GB 31657.10-2025，迪马助力蜂产品中磺胺类药物及抗菌增效剂残留量的测定

蜂产品(蜂蜜、蜂王浆等)作为天然营养滋补品，因富含活性成分而备受消费者青睐，其质量安全直接关系人体健康与行业可持续发展。磺胺类药物(如磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑等)及抗菌增效剂(如甲氧苄啶)因抗菌谱广、价格低廉，曾被广泛用于蜂群疾病防治，以降低蜂群感染风险、保障蜂蜜产量。然而，此类药物在蜂体内代谢缓慢，易通过摄食、分泌等过程残留于蜂产品中，长期摄入含残留的蜂产品可能导致人体肠道菌群失调、过敏反应，甚至诱导细菌耐药性，对免疫力较弱的儿童、老人等群体构成潜在健康威胁。

为规范蜂产品市场秩序、保障消费者权益，全球多个国家和地区已对蜂产品中磺胺类药物及抗菌增效剂残留制定严格限量标准。例如，我国GB 2763-2021《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》明确规定了蜂产品中多种磺胺类药物的联合残留限量；欧盟、美国等也通过相应法规设定了严苛的残留控制指标，成为蜂产品国际贸易中的重要质量门槛。

准确、灵敏的残留检测方法是落实限量标准、开展质量监管的核心技术支撑。蜂产品基质复杂，含有大量糖类、蛋白质、黄酮类等干扰物质，且磺胺类药物及抗菌增效剂残留水平通常较低(μg/kg 级)，对检测方法的分离净化能力、灵敏度及特异性提出了极高要求。目前，相关检测技术已从传统的比色法、薄层色谱法，逐步发展为高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)等现代分析技术，其中HPLC-MS/MS因兼具高分离效率与高定性定量准确性，成为复杂基质中痕量药物残留检测的主流手段。GB 31657.10-2025《食品安全国家标准 蜂产品中磺胺类药物及抗菌增效剂残留量的测定》作为2025年实施的蜂产品兽药残留检测新标准，其制定和出台是基于蜂产品质量安全监管需求、旧标准局限性以及国际检测技术发展等多重背景。

迪马科技参考GB 31657.10-2025重现了此方法，在此基础上优化了分析条件和蜂蜜样品的提取过程，使用我司色谱柱Leapsil C18，100x2.1mm，2.7μm (Cat.#:86005)进行测定，蜂蜜样品使用PSA、C18净化，蜂王浆样品使用PMR净化，基质匹配标准溶液进行计算，添加水平为1μg/kg的蜂蜜样品加标回收率可做到64%-104%，添加水平为10μg/kg的蜂蜜样品加标回收率可做到63%-104%；添加水平为10μg/kg的蜂王浆样品加标回收率可做到77%-114%，添加水平为100μg/kg的蜂王浆样品加标回收率可做到75%-113%，符合标准要求。

本方案适用蜂蜜和蜂王浆中磺胺类药物及抗菌增效剂残留量检测，蜂蜜定量限为1μg/kg，蜂王浆定量限为10μg/kg。

(1) 磺胺及抗菌增效剂混合标准储备液：100μg/mL磺胺混合标准储备液（Cat.#:48846）由迪马科技标准品部提供。

(2) 磺胺及抗菌增效剂混合标准中间液Ⅰ：准确吸取适量混合标准储备液，用10%乙腈配制成磺胺及抗菌增效剂混合标准中间液，浓度为1.0μg/mL。

(3) 磺胺及抗菌增效剂混合标准中间液Ⅱ：准确吸取适量混合标准储备液，用10%乙腈配制成磺胺及抗菌增效剂混合标准中间液，浓度为100ng/mL。

蜂蜜：

(1) 称取5g样品于50mL塑料离心管中；

(2) 向离心管中加入5mL 0.1%甲酸溶液，涡旋混匀；

(3) 向离心管中加入10mL乙腈，振荡5min；

(4) 再向离心管中加入1g氯化钠和4g无水硫酸钠，涡旋1min；

(5) 8000rmp离心5min；

(6) 移取上清至另一个离心管中，向残渣和剩余液体中加入10mL乙腈，涡旋1min，8000rmp离心5min，合并上清液。

蜂王浆：

(1) 称取1g样品于50mL塑料离心管中；

(2) 向离心管中加入2mL水，涡旋混匀；

(3) 再向离心管中加入8mL乙腈，振荡10min；

(4) 8000rmp离心5min；

(5) 移取上清至另一个离心管中，备用。

蜂蜜：吸取全部备用液于50mL离心管中，加入PSA 50mg、C18 150mg、无水硫酸钠900mg，涡旋1min，8000rmp离心5min，取上层清液4mL于40℃水浴氮气吹干，残余物中加入10%乙腈溶液1mL，充分溶解，经0.22μm尼龙滤膜过滤（Cat.#:37177），待测定。

蜂王浆：吸取全部备用液过600mg/6mL PMR固相萃取柱（Cat.#:65990），收集流出液，取流出液1mL于40℃水浴氮气吹干，残余物中加入10%乙腈溶液2mL，充分溶解，经0.22μL尼龙滤膜过滤（Cat.#:37177），待测定。

注：同方法制备基质匹配标准溶液。

UPLC条件

色谱柱：Leapsil C18，100×2.1mm，2.7μm  (Cat.#:86005)

流速：0.3mL/min

进样量：5μL

柱温：35℃

流动相：A:0.5%甲酸水溶液 B:0.1%甲酸甲醇

梯度设置:

质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi 

离子源温度：500℃

精密量取混合标准工作液适量，分别加入经提取、净化、氮吹后的蜂王浆空白试料残渣中，40℃水浴氮吹干残余液体，加入2mL 10%乙腈，涡旋溶解残余物，配制成浓度为0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL的基质匹配标准工作溶液，0.22μm尼龙滤膜过滤。

1. 蜂蜜选用市场中比较常见的某品牌洋槐蜂蜜作为样品，重现标准，经过大量重复性实验测得磺胺脒加标回收率50%-55%，提取损失高达30%。磺胺脒是一种强极性化合物，蜂蜜不同于蜂王浆，是一个均质、连续、高粘度糖相，因此蜂蜜对磺胺脒的保留以高强度、高密度的氢键结合为主，提取损失较大。采取10mL乙腈提取2次的方法，可以使磺胺脒回收率稳定在60%以上，达到标准要求60%-110%。

2. 为了提高部分目标物的响应值，对液相方法进行了优化，不同于国标，本方法提高了流动相中的甲酸含量并调整了梯度程序。