上海富衡 | 常见荧光蛋白标签

在现代生物学研究中，荧光蛋白标签如同为微观世界点亮的明灯，让科研人员能够清晰追踪和分析细胞内的生物分子与过程。以下介绍几种常见的荧光蛋白标签及其特性、应用场景。

绿色荧光蛋白（GFP）

1. 来源与发现：绿色荧光蛋白从维多利亚多管发光水母中发现。1962 年，下村修首次分离出这种蛋白，后来经过马丁・查尔菲、钱永健等人的深入研究与改造，使其在生物学领域得到广泛应用。

2. 特性：GFP 最大激发波长约为 395nm（紫外光），还有一个较小的激发峰在 475nm（蓝光），发射波长约为 509nm，呈现绿色荧光。它具有良好的稳定性，在多种实验条件下能保持荧光特性，对细胞毒性小，不影响细胞正常生理功能。

3. 应用：广泛用于基因表达、蛋白质定位和细胞追踪研究。例如，将 GFP 基因与目标基因融合，通过荧光显微镜观察绿色荧光，就能确定目标基因在细胞内的表达位置和时间。在细胞生物学研究中，标记特定细胞群体，观察细胞在发育过程中的迁移和分化。

增强型绿色荧光蛋白（EGFP）

1. 改造与特性：EGFP 是 GFP 的突变体。通过对 GFP 氨基酸序列的改造，增强了荧光强度和折叠效率。其激发波长为 488nm，发射波长为 507nm 。与 GFP 相比，EGFP 荧光信号更强，在哺乳动物细胞中的表达效率更高，对细胞的适应性更好。

2. 应用：常用于基因转染实验，作为报告基因检测转染效率。在构建重组质粒时，将 EGFP 与目的基因连接，转染细胞后，通过检测绿色荧光可直观判断目的基因是否成功导入细胞。也用于细胞内蛋白质动态变化的实时监测，因其强荧光信号便于长时间追踪观察。

红色荧光蛋白（RFP）

1. 来源与特性：RFP 来源于珊瑚，其激发波长约为 558nm，发射波长约为 583nm，呈现红色荧光。RFP 的优势在于其荧光颜色与 GFP 等绿色荧光蛋白不同，可实现双色或多色标记。它同样具有较好的稳定性和低细胞毒性。

2. 应用：与绿色荧光蛋白搭配，用于双色标记实验。比如在研究细胞间相互作用时，用 GFP 标记一种细胞，RFP 标记另一种细胞，通过不同颜色荧光区分两种细胞，观察它们的相互作用过程。也用于监测蛋白质 - 蛋白质相互作用，通过将不同蛋白质分别与 GFP 和 RFP 融合，利用荧光共振能量转移（FRET）技术检测蛋白质间的相互作用。

单体红色荧光蛋白（mRFP）

1. 特性与优势：mRFP 是单体形式的红色荧光蛋白，克服了一些传统 RFP 容易形成多聚体，可能影响目标蛋白功能和定位的问题。它的激发波长约为 584nm，发射波长约为 607nm 。mRFP 具有良好的光稳定性和亮度，在多色成像实验中表现出色。

2. 应用：在多色荧光标记实验中，作为红色荧光标记物与其他颜色荧光蛋白（如 GFP、黄色荧光蛋白等）组合使用，用于同时追踪多个生物分子或细胞过程。在构建复杂的基因表达调控模型中，mRFP 可作为其中一个标记，与其他荧光蛋白标记协同工作，帮助研究人员深入理解基因调控网络

黄色荧光蛋白（YFP）

1. 特性：YFP 是 GFP 的又一突变体，激发波长约为 514nm，发射波长约为 527nm，呈现黄色荧光。YFP 对环境变化较为敏感，尤其是对 pH 值和钙离子浓度的变化，可作为一种环境敏感型荧光蛋白。

2. 应用：常用于监测细胞内微环境变化。例如，利用 YFP 对钙离子浓度敏感的特性，将其与钙结合蛋白融合，用于检测细胞内钙离子浓度的动态变化，研究细胞信号转导过程。在研究细胞内细胞器 pH 值变化时，YFP 也可作为有效的荧光指示剂。

这些常见的荧光蛋白标签各有特性，科研人员可根据实验目的、样本类型和检测需求选择合适的荧光蛋白标签，为生物学研究提供强大的可视化工具。