01
蛋白质纯度鉴定是什么？
蛋白质纯度鉴定主要是指检测蛋白质样品中目标蛋白质的含量或比例，其反映了蛋白质样品中是否存在其他杂质或污染物，如核酸、多糖、脂质、无关蛋白质等。
蛋白质纯度的测定评价蛋白质的分离效果，选择合适的纯化步骤和条件，优化纯化方案，提高纯化效率和产量。 同时，蛋白质纯度也影响了蛋白质的活性和功能，高纯度的蛋白质更容易保持天然构象和生物活性，更适合进行结构分析和功能研究。
02
如何做蛋白质纯度鉴定？
根据2020年版《中华人民共和国药典》：第四法——可采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测
图片来源于网络
检测结果计算和判定:
图片来源于网络
03
蛋白质纯度检测流程
① 上样，蛋白质凝胶电泳
② 考染/银染进行蛋白质染色
③ 凝胶电泳成像（白光反射/白光透射模式）
④ 电泳图和条带数据分析
04
蛋白质纯度鉴定数据分析
传统凝胶成像多采用白光反射模式进行检测，而现在多数客户为获得更加清晰和精准的条带和峰图，已逐渐使用Coomassie染色凝胶密度测定模式（白光透射OD模式），该模式可自动将强度数据转换为光密度 (OD) 值。当光穿过材料时，透过材料的光量呈指数下降。比值I/I0的负对数，即OD与吸收染料的浓度成正比。白光透射OD模式能够有效减除副峰干扰获得更精准的纯度数据！
图：强度与样品OD的关系是一个非线性函数，而OD在很宽的动态范围内显示线性响应，因此非常适合精确测量蛋白质浓度和纯度
05
蛋白质纯度鉴定实验Tips
电泳温度不宜过高：出现微笑条带，泳道不整齐
染色脱色时间sop需要建立，脱色时间过长会导致条带颜色过浅
考染结果需使用16 bit TIF矢量图数据分析灰度及纯度（300 dpi以上）
不建议使用手机拍照（无法进行灰度分析）
电泳计算泳道需排除杂交及边缘背景干扰
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