Citrine结合激光显微切割技术，创新解决心肌淀粉样变蛋白分型

心脏淀粉样变性（CA）是一种罕见疾病，其发病机制为蛋白折叠形成含有β片层的纤维样结构，并在细胞外沉积^[1]。沉积蛋白的细胞毒性和对组织细胞结构的破坏，造成心脏功能损害，引发诸如心脏壁增厚、舒张功能障碍以及冠状动脉微血管功能障碍等疾病。不同沉积蛋白所致脏器损伤的治疗措施差异巨大，因此准确识别淀粉样沉积蛋白类型（分型）对治疗选择与预后判断至关重要。

现有主流技术在组织样本淀粉样变蛋白分析中面临着如下挑战：

1. 免疫组化常出现抗原表位的丢失和非特异性蛋白干扰，可能会导致误判或出现混合阳性结果^[2]；

2. 商业抗体可能无法有效检测突变或截断的淀粉样蛋白或β折叠构象，从而可能导致假阴性结果^[3]；

3. 常规蛋白质组学仪器无医疗器械注册证，蛋白质组学数据分析需要生物信息学专业知识，难以推广至临床应用^[4]。

在本研究中，研究团队首次将激光显微切割技术与LC-MS/MS技术有机融合，构建出一个适用于复杂蛋白鉴定分析靶向蛋白质组学平台。利用淀粉样变蛋白特殊的诊断性染色性状，使用Leica激光显微切割仪LMD7精准分离刚果红阳性的区域（图1），显著减少非病变组织中本底蛋白对后续质谱检测的干扰。

阳性组织切片经过蛋白提取，蛋白变性、还原、烷基化和胰蛋白酶消化后使用SCIEX的Citrine? Triple Quad? System 和 ZenoTOF? 7600 system 分别建立靶向和非靶向蛋白质组学方法，验证建立19种心肌淀粉样变常见分型蛋白的特征肽段检测方法。

阜外医院病理科回顾性纳入104 例福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）心肌组织。该队列包括52例心脏淀粉样变患者和52例肥厚型心肌病患者。图3结果显示三种伴侣蛋白在阳性样本中的响应强度远高于阴性样本，可用于鉴别淀粉样变疾病的阴阳性。图4结果显示3种伴侣蛋白和3种常见分型蛋白的ROC曲线，表明新建立的靶向蛋白质谱法与非靶向蛋白质组学结果的一致率可以满足临床对鉴定疾病分型的需求。同时靶向蛋白质组学方案不仅实现88.5%的明确分型率（传统免疫组化30.8%），更首次检出11.5%的混合亚型病例（如AL与ATTR共存），避免误诊导致的错误治疗，为个体化综合治疗提供关键依据。 

本研究基于Citrine的靶向蛋白质组学技术不仅在蛋白分析灵敏度和特异性方面实现重大提升，更实现了真正意义上的精准诊断，可实现对心肌淀粉样变疾病分型的直接判读，以及罕见分型的快速鉴定。突破免疫组化方法和非靶向质谱法对抗体依赖、对疾病伴随分型鉴定困难、对数据分析要求高且分析耗时等瓶颈。该项技术融合了激光显微切割技术和靶向蛋白质组学的全流程方案，以期能够为空间蛋白质组学和罕见病分型研究提供新的临床应用思路。

文章作者王恺隽教授凭借该文章中的创新性研究荣获北美华人临床化学协会（NACCCA）的“2025实验医学创新奖”！颁奖仪式在美国芝加哥ADLM期间NACCCA 45周年颁奖晚宴举行，由本届NACCCA主席美国哈佛医学院吴芳教授主持，由上任的ADLM academy chair及NACCCA award committee chair美国宾州大学赫尔希医学院朱玉胜教授颁奖。

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作为奖项支持的SCIEX公司代表，全球临床产品高级经理Michael Jarvis和全球临床市场开发经理Pierre Negri也出席了颁奖仪式并接受NACCCA的认可证书。

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论文信息

? 题目：

Development of a novel targeted LC-MS/MS methods for the typing of cardiac amyloidosis

? 期刊：

Analytica Chimica Acta（JCR一区, IF 6.0）https://doi.org/10.1016/j.aca.2025.344453