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阿摩尔之眼:定量蛋白质组迈入新纪元

来源:SCIEX(爱博才思) 更新时间:2026-01-15 14:15:26 阅读量:14
导读:阿摩尔之眼:定量蛋白质组迈入新纪元


高分辨多反应监测技术(MRMHR)是一种基于高分辨率质谱仪的先进靶向定量技术。它在继承传统MRM高灵敏度、高特异性和宽动态范围等优点的同时,凭借其高分辨性能实现了质的飞跃。该技术已成为连接蛋白质组学发现与临床、制药等实际应用领域不可或缺的桥梁,是进行精准靶向多肽定量分析的强大工具之一。在具体分析流程中,该技术首先通过Q1质量选择器筛选目标母离子,随后利用飞行时间(TOF)质量分析器采集所有碎片离子。在定量环节,通过SCIEX OS软件专有的HRMS定量流程,系统能够自动筛选出响应最优的碎片离子并进行离子流色谱峰的加和计算,从而高效、精准地获得肽段定量信息。


SCIEX新一代ZenoTOF 8600高分辨质谱系统搭载了全流速范围的OptiFlow Pro离子源,DJet/QJet离子传输组件,Zeno Trap阱和混合型检测器,灵敏度得到10倍以上的提升,结合碎片离子自动筛选及加和定量分析的HRMS定量流程实现超高灵敏度、高效快速的靶向多肽定量分析。

ZenoTOF 8600极速超敏多重碎裂质谱系统


方案特点


1

与上一代产品SCIEX ZenoTOF 7600系统相比,MRMHR模式多肽定量限LLOQ平均提升33倍;

2

线性动态范围达4.3个数量级,全浓度范围精密度CV<13%;

3

SCIEX OS HRMS流程自动筛选使用多个高丰度碎片离子加和定量分析,提升肽段定量LLOQ;

4

多肽定量限低至亚amol水平,比肩高端QQQ定量性能。


定量限提升33倍,ZenoTOF 8600高分辨质谱系统多肽定量分析表现优异


研究中,对大鼠血浆基质中的25条多肽的混合物,SCIEX ZenoTOF 8600系统使用Zeno MRMHR技术进行靶向定量分析。结果如下图所示,三条代表性多肽在最低进样量时,XIC峰信噪比极好,空白基质无背景干扰。新一代SCIEX ZenoTOF 8600系统在多肽定量检测中展现出优异的定量灵敏度。


与上一代产品相比

SCIEX ZenoTOF 8600系统

多肽定量LLOQ平均提升33倍


三条代表性多肽的提取离子色谱图XIC

与SCIEX ZenoTOF 7600系统相比

SCIEX ZenoTOF 8600系统的定量下限LLOQ

分别提升了3倍、27倍和81倍


高分辨质谱MRMHR可采集目标多肽所有子离子信息。每一条目标多肽选择三个子离子的峰面积求和得到多肽的定量数据,与对应多肽标准品浓度进行线性拟合确定定量线性范围。结果显示25条多肽的线性动态范围LDR可达4.3个数量级,重复测定精密度CV%小于13%。该结果展现了SCIEX ZenoTOF 8600系统在广泛的浓度区间内有优异的定量能力,数据重现性好。


三条代表性多肽

在SCIEX ZenoTOF 8600系统上的

校准曲线线性区间跨至4.3个数量级


从配置到洞察:SCIEX OS一体化解决方案实现肽段定量的智能化与高灵敏度


基于SCIEX OS平台的高分辨质谱肽段定量工作流程提供了一套高度集成的解决方案。在该HRMS流程中,系统支持碎片离子的自动筛选,用户在优化设置中灵活配置保留时间容差、碎片离子处理方式(加和或单独使用)以及定量参数。通过内置算法,系统能够自动匹配理论肽段并筛选出最佳碎片离子组合,用户还可根据实际需求,选择面向定量下限(LLOQ)优化或常规分析的碎片策略。该方案充分发挥了Zeno陷阱技术在灵敏度提升方面的优势,并结合高丰度碎片离子的加和定量,实现了协同性能增益。


搭载在SCIEX OS软件上

可自动筛选碎片离子的精简高效的HRMS定量流程


使用多种碎片离子进行加和定量可提高肽段定量LLOQ。如下图所示,比使用单独碎片离子定量,肽段YIELAPGVDN使用加和离子定量LLOQ提升16倍。EGHLSPDIVAEQK使用2个碎片离子进行加和用于定量,LLOQ提升2倍。肽段LVGTPAEER使用3个碎片离子用于加和定量,LLOQ提升4倍。


使用加和离子与单离子方法获得的基质空白

及3条示例肽段LLOQ(定量下限)的

代表性色谱图


在使用多个碎片离子对肽段进行定量分析时,获得优异的定量线性。3条示例肽段,其中线性动态范围最高达到4.5个数量级,R2均大于0.992。样本测定准确度均在85%-115%范围内,整体精密度<13%。


使用SCIEX OS软件中

自动碎片离子选择功能获得的校准曲线结果


SCIEX ZenoTOF 8600系统定量能力

比肩SCIEX高端定量质谱


在多肽样本的定量分析中,SCIEX ZenoTOF 8600系统可以达到亚amol的定量灵敏度,结果表明ZenoTOF 8600的MRMHR具备领先的高分辨质谱的定量能力。同时,在生物基质样本的小分子化合物定量分析中,SCIEX ZenoTOF 8600系统的定量灵敏度(LLOQ)是SCIEX QQQ 7500的2.5倍。证明SCIEX ZenoTOF 8600系统的MRMHR采集模式,在定量分析中,可以达到比肩SCIEX高端QQQ质谱的定量性能。


ZenoTOF 和QQQ 7500定量灵敏度对比


总结


本研究基于SCIEX ZenoTOF 8600系统,结合高分辨多反应监测(MRMHR)技术与SCIEX OS平台的集成化肽段定量流程,实现了在多肽定量分析中的显著性能提升。系统通过离子源、离子传输组件、Zeno Trap等硬件技术全面升级,灵敏度平均提升33倍,部分肽段定量下限(LLOQ)最高提升达81倍,并在线性动态范围(达4.5个数量级)、精密度(CV < 13%)与准确度(85–115%)方面均表现出优异性能。


SCIEX OS软件支持碎片离子自动筛选与加和定量策略,显著提升了LLOQ(最高达16倍),同时其内置的合规性设计符合21 CFR Part 11法规要求,保障了数据完整性与系统管理效率。该集成化工作流程为蛋白质组学从发现向临床与制药转化提供了高灵敏度、高重现性、合规可靠的靶向定量分析解决方案。


扫码查看完整解决方案


 参考文献 

1. 高分辨质谱ZenoTOF 8600产品手册 

2. Enhanced sensitivity and quantitative performance featuring a novel quadrupole time of flight mass spectrometer.MKT-33800-A.

3. Automated peptide fragment ion selection and summation for streamlined HRMS quantitative workflows. MKT-36303-A.

4. US FDA 生物分析方法验证指南(2018年),Bioanalytical Method Validation, Guidance for industry


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