药典方案集锦丨2025 版《中国药典》人工牛黄中胆酸类物质分析方案

牛黄，又称天然牛黄，为牛科动物牛的干燥胆结石。是传统的名贵中药。临床上常用于热病神昏，中风痰迷，……，口舌生疮，痈肿疔疮等急难重症。例如用于急救的安宫牛黄丸，用于清热解 毒的牛黄解 毒片等中药制剂中均含有牛黄。

来源于天然的牛黄，其产量低，质量难于控制。随着对牛黄成分、药理、药效研究的深入，目前天然牛黄的代用品也已经在广泛使用，《中国药典》2025 版收载了人工牛黄与体外培育牛黄作为牛黄的替代品，其主要成分与天然牛黄相似。

人工牛黄，作为主要牛黄替代品，由牛胆粉、胆酸、猪去氧胆酸、牛磺酸、胆红素、胆固醇、微量元素等加工制成。所含主要成分有胆酸类、胆红素、胆固醇、微量元素等。其中，胆酸类是其产生药效的主要物质。

关于人工牛黄中胆酸类的质量控制 ，《中国药典》2020 一部主要采用分光光度法测定胆酸的含量，不能够反应人工牛黄中各种胆酸类物质的特征和含量；有鉴于此，2025 版一部在人工牛黄 【含量测定】“胆酸类”项下，改进了胆酸类物质的控制方法，采用了 HPLC-ELSD 方法对胆酸类物质进行了含量测定。其中，以牛磺胆酸、牛磺猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸和去氧胆酸作为样品验证系统适用性，理论板数以牛磺胆酸峰计不低于 10000；牛磺胆酸与牛磺猪去氧胆酸的分离度不小于 2.0；鹅去氧胆酸与去氧胆酸的分离度不小于 1.5。以牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、胆酸、甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸和猪去氧胆酸等 6 种物质作为对照品，控制牛黄中的胆酸类物质含量。

为适应人工牛黄新的质量控制要求，本文根据《中国药典》2025 版“0512 高效液相色谱法”通则，以及人工牛黄【含量测定】“胆酸类”项下系统适用性下的规定，以系统适用性样品评价了 HPLC 方法与快速 HPLC 方法，并建立了人工牛黄样品中胆酸类物质的 HPLC 与快速 HPLC 分析方法，样品测试结果显示快速 HPLC 方法对于人工牛黄中胆酸类物质分离良好，相较于 HPLC 方法，分析时间大幅缩短，极大提高了分析效率。

第一部分 仪器系统

1260 Infinity III 600bar系统，1290 Infinity III ELSD 检测器

第二部分 HPLC 分析结果

色谱条件

色谱柱：HPH-C18（250×4.6mm，4um；PN：690970-702）

流动相：A：0.2% 三氟乙酸；B：乙腈

梯度洗脱：

流速：1.0mL/min

柱温：15℃

ELSD：雾化温度：30℃；蒸发温度：80℃；气体流速：1.6L/min

系统适用性

理论板数：以牛磺胆酸峰计不低于 70000；

分离度：牛磺胆酸与牛磺猪去氧胆酸分离度大于 10；鹅去氧胆酸与去氧胆酸的分离度大于 6；

系统适用性色谱图：

对照品色谱图：

人工牛黄色谱图：

第三部分 快速 HPLC 分析结果

由于 HPLC 梯度分析时间为 45min，加上冲洗与再平衡，预计单针分析时间接近 1 小时，分析效率较低。本文选择 Agilent Polaris 3um 色谱柱作为分离性能相当的色谱柱，并根据《中国药典》2025 版四部 “0512 高效液相色谱法”通则中规定的转换方法对原方法参数进行了快速转换，具体结果如下。

色谱条件

色谱柱：Polaris C18-ether（150×3mm，3um；PN：A2021150X030）

流动相：A：0.2% 三氟乙酸；B：乙腈

梯度洗脱：

流速：0.7mL/min

柱温：15℃

ELSD：雾化温度：30℃；蒸发温度：80℃；气体流速：1.6L/min

系统适用性

理论板数：以牛磺胆酸峰计不低于 50000；

分离度：牛磺胆酸与牛磺猪去氧胆酸分离度大于 9；鹅去氧胆酸与去氧胆酸的分离度大于 2.5；

系统适用性色谱图：

对照品色谱图：

人工牛黄色谱图：

结论

本文采用 1260 Infinty III 600bar 系统结合 1290 Infinity III ELSD，使用 HPH-C18 HPLC 重现了《中国药典》2025 版 人工牛黄 【含量测定】“胆酸类”项下方法；并采用 Polaris C18 3um 色谱柱，在满足《中国药典》2025 四部“0512 高效液相色谱法”以及人工牛黄 【含量测定】“胆酸类”项下 系统适用性的要求下，并且基线分离对照品 6 种胆酸。通过合规性的方法参数转换，建立了人工牛黄中胆酸类成分的快速分析方法。

本文人工牛黄快速 HPLC 方法与《中国药典》2025 版人工牛黄原方法相比，分析时间从 45min 缩短至约 16min，分析效率提高约 3 倍，极大的提高了人工牛黄“胆酸类”物质测定时的分析效率。