固相萃取-液相色谱法测定血液中的地西 泮

前言

地西 泮别名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓，是一种中 枢精神系统镇定剂，主要用于人和动物镇定催眠及癫痫的ZL。近年来，地西 泮在临床的应用越来越广泛，此类药物在中毒 药物中居首位，中毒和疑似中毒的病例常见，所以建立一种GX、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对血清中的地西 泮进行固相萃取、富集，用GX液相色谱仪进行检测。

本文参考《SPE-HPLC/MS/MS法检测人唾液中的地西 泮及其代谢产物》采用SPE1000全自动固相萃取系统，测定地西 泮的回收效果，实验证明，地西 泮回收率在90.5%~98.1 %之间，重现性RSD为2.7 %，回收率和重现性良好，说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠、稳定，适用于血液中的地西 泮样品前处理。

1、实验过程

1.1仪器与试剂

SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

LC600高压GX液相色谱仪（莱伯泰科公司）；

地西 泮，1000mg/L，坛墨质检；

甲醇（色谱纯）；

乙酸铵（分析纯）：配制成0.2mol/L，PH=6的水溶液；

C18固相萃取柱（60mg/3mL莱伯泰科）；

实验用水：超纯水。

1.2 标准工作液的配置

取1mL地西 泮标品于10mL容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为100μg/mL的标准储备液。

取20 μL标准储备液，用甲醇定容到1mL，配制成2μg/mL标准工作液。

1.3实验方法

1.3.1 样品制备

取1mL血液，加入100 μL的标准工作液，混匀，使血样中地西 泮的加标浓度为200 μg/L，用水稀释到5 mL，涡旋5min，5000 rad/min离心10 min。取全部上清液，待固相萃取处理。

同时做样品空白。

1.3.2 固相萃取及浓缩

按照图1所示的方法进行SPE1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，氮吹浓缩至1mL以下，用甲醇定容至1mL，待测。

图1   地西 泮的SPE 1000 方法

1.3.3 HPLC测定水中地西 泮

色谱柱：C18，5μm，4.6mm*150mm；

波    长：230nm；

流    速：1.0mL/min；

进样量：20μL；

流动相：甲醇：水=65:35V/V

2、实验结果

2.1  地西 泮色谱图

2.1.1地西 泮标品色谱图

图2为取100μL的标准工作液，用甲醇定容到1.0mL检测（200μg/L），地西 泮标品出峰色谱图，出峰时间为12.1min。

图2  地西 泮标品出峰色谱图

2.1.2血液中地西 泮加标样品色谱图

图3地西 泮加标样品出峰色谱图，出峰时间为12.1min。 

图3  地西 泮加标样品出峰色谱图

2.1.3血液中地西 泮样品色谱图

图4地西 泮空白样品出峰色谱图。

图4  空白样品色谱图

2.2 HPLC测定血液中地西 泮回收率

HPLC测定血液中地西 泮回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率在90.5%~98.1 %之间，重现性RSD为 2.7%。

表1  血液中地西 泮的加标回收率（加标量200μg/L）

3、实验结论

1、254nm和230nm的波长均可检测到地西 泮，但地西 泮在230nm波长下，信号响应ZG。

2、SPE1000全自动固相萃取系统净化的样品，其回收率和重现性良好，工作效率高，可应用于此类样品的前处理方法中。

4、参考标准

SPE-HPLC/MS/MS法检测人唾液中的地西 泮及其代谢产物

GX液相色谱法测定 地西 泮中毒患者血浆与血清中地西 泮浓度

固相萃取—反相GX液相色谱法同时测定人血清中地西 泮及氯硝西 泮