免费试用！Bst Plus DNA聚合酶-等温扩增“酶”你不行

来源：翌圣生物科技(上海)股份有限公司      分类： 2024-12-25 14:25:16 23阅读次数

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体外核酸扩增是分子生物学研究的基础，其中PCR是第一个也是目前应用最广泛的核酸扩增技术。常规PCR技术依赖特定的仪器设备，存在扩增影响因素较多、价格昂贵、耗时较长等缺点，限制了其在基层及临床现场检测中的应用。

 

相比之下，等温核酸扩增技术(Isothermal Amplification Technology, IAT)只需恒温装置（如水浴锅），通过不同活性的酶及特异性引物在恒定温度下便能实现高效快速扩增核酸的目的，更适合病原体临床现场快速诊断。

 

图1.常规PCR技术与等温扩增技术IAT对比

 

等温核酸扩增技术根据不同的扩增原理可分为很多类，主要包括环介导等温扩增(LAMP)、交叉引物扩增(CPA)、链替代扩增(SDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、依赖核酸序列的扩增(NASBA)、滚环扩增(RCA)和依赖解旋酶的扩增(HAD)等。目前最常见、应用最广的当属日本学者Notomi等在2000年开发的环介导核酸等温扩增技术(LAMP)。LAMP的技术特征是针对靶基因上的六个区域设计四条引物，利用链置换型的BST DNA聚合酶在60~65℃恒温条件下进行扩增反应，在15-60 min内实现10⁹-10¹⁰倍的扩增。

 

图2.qPCR与环介导等温扩增LAMP技术原理对比示意图

 

Bst DNA聚合酶是LAMP等温扩增技术的核心酶，具有较强热稳定性、链置换活性及聚合酶活性，能在恒温条件下快速、高效、特异性的扩增模板，无需PCR热变性扩增循环，1小时内完成整个LAMP实验。

 

翌圣生物升级Bst Plus DNA Polymerase是将缺少5′→3′外切核酸酶结构域的Bacillus stearothermophilus DNA 聚合酶基因在E.coli 中表达纯化而得，具有5′→3′DNA 聚合酶活性及强链置换能力。与野生型相比，该酶的灵敏度、扩增效率、稳定性等方面均有大幅提高，同时增加了dUTP耐受性，可广泛应用于基于等温扩增技术的病原体快速检测、单核苷酸多态性测序、富含GC区域或ng级含量DNA模板快速测序、二代测序文库构建过程中的链等温置换反应。

 

图3.Bst DNA聚合酶特性及链置换原理

 

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