琼脂糖凝胶电泳技术介绍

那么下面上海嘉鹏科技有限公司为大家简单介绍一下关于琼脂糖凝胶电泳技术介绍：

一、凝胶制备

1.微波炉溶解琼脂糖时，胶液沸腾冲溢出三角锥瓶微波炉加热时胶液可能发生剧烈沸腾，

    1）总液体量不宜超过三角锥瓶的 50% 容量，

    2）2% 以上胶液设置中火加热

    3）胶液剧烈沸腾时，停止加热，移开三角锥瓶，请戴上防热手套，小心摇动三角锥瓶，然后再次加热，胶液沸腾直至胶液清澈，保证琼脂糖完全溶解。

2.琼脂糖电泳图像背景模糊不清

琼脂糖没有完全溶解会造成电泳图像背景模糊不清。 完全溶解的琼脂糖胶液清澈，三角锥瓶内壁应没有粘附琼脂糖颗粒。

3.加热后水分蒸发，如需要应加入热的蒸馏水，补足到原来的重量，摇匀。

二、 电泳

1.DNA 条带模糊，拖尾

   1） DNA 降解。避免核酸酶污染。

   2）DNA 上样量过多。减少凝胶中 DNA 上样量。

   3） 电泳缓冲液陈旧: 电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低， pH 值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液。

   4）电泳条件不合适。电泳时电压不应超过 20V/cm ，温度＜30 ℃ ,巨大 DNA 链，温度应＜15 ℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。

   5）DNA 样含盐过高。泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。

   6）有蛋白污染。电泳前抽提去除蛋白。

   7）DNA 变性。电泳前勿加热，用 20mM NaCl 缓冲液稀释 DNA 。

2.DNA 条带淡弱或无 DNA 带

   1）DNA 的上样量不够：增加 DNA 的上样量。

   2）DNA 降解：避免 DNA 的核酸酶污染。

   3）DNA 走出凝胶：缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度。

   4）分子大小相近的 DNA 带不易分辨。增加电泳时间，使用正确的凝胶浓度。

   5）DNA 变性：电泳前请勿高温加热 DNA 链，用 20mM NaCl Buffer稀释DNA 。

   6）DNA 链巨大，常规凝胶电泳不合适。在脉冲凝胶电泳上分析。

3.DNA MARKER 条带扭曲

   1）配制凝胶的缓冲液和电泳缓冲液不是同时配制的。使用同时配制的缓冲液。电泳时缓冲液高过液面1 － 2mm 即可。

   2）电泳时电压过高。可以在电泳前 15 分钟用较低电压 (3V/cm), 等条带出孔后，再调电压。

   3）尽量慢慢加样 ,等样品自然沉降后再加电压。

以上就是上海嘉鹏科技有限公司为大家整理总结关于琼脂糖凝胶电泳技术介绍。

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