多年前WAVE 25高效灌流培养技术推出后,受到了众多用户的关注。目前,众多用户已经将WAVE灌流技术成功地灵活应用于种子培养、蛋白的生产、灌流培养基筛选等工艺环节。
随着工艺、技术的发展,客户越来越多采用上游细胞培养高密度接种工艺,而WAVE 25硬件、软件及耗材针对高效灌流培养技术做的优秀设计,完美契合高密度种子制备工艺需求。
氧传递效率
用数据说话
Kla(体积氧传递系数)是衡量反应器氧气供给能力的核心指标,直接决定了能支撑的细胞密度上限。
对于初次接触WAVE 25反应器的客户,因为没有搅拌桨叶,且通气方式是表层通气,会为WAVE 25反应器的Kla传质效率是否能满足更高密度的细胞培养存在忧虑。其实在产品设计之初,对于WAVE 25的传质能力进行了详细的测试,并进行了拟合,绘制了Kla等高线图。
在50 L的灌流培养袋中的测试结果表明,当培养体积为5 L、摇速35 rpm、角度10°时,Kla值达到139 h?1,这意味着该条件下可支持约250 MVC/mL的细胞密度,远超常规培养需求。在25 L体积下,35 rpm摇速与10°角度的组合能实现62 h?1的kLa值,对应理论细胞密度约115 MVC/mL,轻松满足100 MVC/mL以上的高密度接种要求。能轻松满足目前灌流工艺需求。
图1:The 4D Contour plot derived from kLa-values for the different settings tested when inserted into the DoE based on the CCO-design
实验还发现了一个规律可作为工艺调整参考:
小体积培养时,调整角度对kLa影响更显著;
大体积培养时,改变摇速则能更高效地提升氧传递效率。
这种参数调节的灵活性,让WAVE 25能精准匹配不同规模的培养需求。
高效灌流算法
简化灌流硬件搭建
解决了WAVE 25反应器的传质效率的问题,接下来要思考如何高效的通过软件和硬件的配合,实现稳定的培养基灌注和收获。
其中,灌流体积精度,是影响培养体系是否稳定的关键因素。比如,如果简单设计蠕动泵流速控制培养基补加和收获,但蠕动泵精度较低,且长时间运行后随着管路磨损等,精度会逐渐降低。如果要精确灌流,常规需要额外安装天平或台秤,进行相对精确的联动补料。但是这种方式会增加更多的硬件投入和更大的空间占用。
为了简化灌流操作、提高灌流培养效率,Cytiva(思拓凡)的WAVE 25开创性地将自带Loadcell和蠕动泵进行级联,同时在灌流培养算法里加入了蠕动泵自动校准的功能。这个功能不仅能有效监测培养体积,还能让蠕动泵在进料和收获过程中,根据设定的时间,定期用自带的高精度称重单元对蠕动泵进行自动校准。这样不仅降低了对设备的额外需求,也提升了系统自动化水平,简化了操作。在整个长时间灌流培养过程中,都能维持精确的培养体积和灌注速率。
图2:蠕动泵自动校准示意图
灌流培养袋
简化灌流培养操作
对于灌流培养平台来说,另一个核心的装置就是截留装置。不同于传统Hollow Fiber截留装置,WAVE 25的灌流装置内置了膜孔径为7 μm的截留膜。截留膜整合在WAVE 25标准袋中,伽马辐照灭菌,即开即用。省去了传统Hollow Fiber的管路灭菌,流路搭建和完整性测试的复杂操作,让灌流培养变得简单易上手。
而且截留膜设计为漂浮在液体内,随着Rocker的摇摆,膜也会跟着左右摆动。这种设计方式,可以在一定程度上,形成液体对膜的冲刷作用,延缓膜的堵塞效应。
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实际案例
一步式扩增,效率提升看得见
传统种子扩增从冻存管到2000 L生产罐需要多步摇瓶培养,WAVE传代和200 L/500 L多级种子扩增,耗时总共超过2周。而WAVE 25的灌流功能,可实现一步式扩增,将这一过程缩短至10天,节省了摇瓶扩增和大规模反应器种子扩增的物料投入,降低了操作风险。
具体的实现方式和操作工艺,可以扫描文末二维码下载文件进行详细查阅。
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